细胞生物学技术A 2014细胞生物学新技术2.pptVIP

细胞信号转导研究技术(2); His-Cax - + - + HA-p65 - - + +;现在我们有足够的证据表明，p65是Cax的相互作用蛋白 p65是转录因子NF –κB的一个亚基，NF –κB已经得到广泛深入的研究。 下一步的研究应该是Cax是否参与调节NF –κB的活性，如何调节？ ;NF-κB的激活 ;转录因子(transcription factor);在研究某些因素对NF–κB信号系统的影响的时候，分为不同层次： 细胞质层次： IκB激酶的激活（kinase assay) IκB的降解(Western blot) 细胞核层次： NF–κB与DNA的结合能力（in vitro) （EMSA) NF–κB与DNA的结合（in vivo)(ChIP) NF–κB与co-activator或co-repressor 的关系;0 5 10 15 30 60 0 5 10 15 30 60 min ;抗原等蛋白样品经SDS处理后全部带上负电荷，从而使蛋白之间仅有分子大小的差异。 ;将凝胶置于电场中，凝胶的底部接正极。;蛋白分子的泳动速率与分子的大小成反比，最小的多肽最先到达凝胶的底部。;Blotting;Antibodies;Polyclonal antibodies;次黄嘌呤磷酸核糖转化