1.2基因工程的应用第1课时学案苏教版选修三.docVIP

PAGE  PAGE - 4 - 1.2 基因工程的应用 第1课时 学案 苏教版选修三 一、基因工程的工具——酶与载体 1、分子手术刀：限制性核酸内切酶（简称限制酶）。 （1）主要从原核生物中分离和纯化。 （2）特点：每种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。 （切割的化学键：磷酸二酯键） （2）切割方式 错位切：产生黏性末端。 平切： 产生平口末端。 2、分子针线：DNA连接酶。 （1）类型：E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶等。 （2）作用：可以将两个DNA 片段之间的2各缺口通过磷酸二酯键同时连接起来。 3、运载工具：载体。 （1）种类：质粒（常用）、噬菌体、可起载体作用的动植物病毒。 （2）质粒： 是细菌细胞质中一种很小的环状、双链DNA分子。 条件：①具有一个至多个限制酶切割位点。 ②能在受体细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 ③具有某些标记基因。（供重组DNA的 鉴定和选择） ④能“友好”地“借居”在受体细胞内； 二、基因工程的一般过程与技术 苏教版人教版1、获得目的基因1、目的基因的获取2、制备重组DNA分子2、基因表达载体的构建3、转化受体细胞3、将目的基因导入受体细胞4、筛选出获得目的基因的受体细胞4、目的基因的检测与鉴定5、培养受体细胞并诱导目的基因的表达1、目的基因的获取 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 逆转录 （1）目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。 （2）获取方法 从自然界已有物种中分离 人工合成 补充：聚合酶链式反应技术（PCR技术） （1）PCR：即聚合酶链式反应 （2）PCR技术：在体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或序列的技术。 （3）方法： 2、基因表达载体的构建（核心） （1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因可以能够表达和发挥作用。 （2）组成：目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因 RNA聚合酶识别和结合部位，位于基因的首端。 终止信号，位于基因的尾端。 鉴别受体细胞中是否含有目的基因。 （3）构建步骤： 用同一种限制酶切割目的基因和载体，从而产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接。 （形成的分子称：重组DNA分子或重组质粒。） 【特别提示】 插入的目的基因只是目的基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒前需有启动子，后需有终止子。 3、将目的基因导入受体细胞（转化） （1）受体种类不同，导入方法不同 导入植物细胞：农杆菌转化法（常用）、基因枪法、花粉管通道法。 导入动物细胞：显微注射法。 导入微生物细胞：Ca2+处理法。 （2）受体细胞的种类 植物：可以是受精卵、体细胞（可经组织培养成完整个体） 动物：受精卵（因为动物细胞的全能性受到抑制） （3）转化实质：目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上。 4、目的基因的检测与鉴定 （1）分子检测 ①检测转基因生物的染色体DNA是否插入了目的基因（DNA分子杂交法） ②检测目的基因是否转录出了mRNA（分子杂交法） ③检测目的基因是否翻译出了蛋白质（抗原—抗体杂交法） （2）个体生物学水平鉴定 检测转基因生物是否具有了我们所需要的遗传特性。 三、基因工程育种 1、方法：提取目的基因→装入载体→导入受体细胞→基因表达→筛选出符合要求的新品种 2、原理：基因重组。 3、优点：目的性强，可以按照人们的意愿定向改造生物；育种周期短。 4、缺点：技术复杂，存在安全性问题。 5、实例：抗软化番茄的培育。