第二章_微生物的纯培养和显微技术幻灯片.pptVIP

第 二 章 微生物的纯培养和显微技术;第二章微生物的纯培养和显微技术;培养物;显微技术是微生物研究的另一项重要技术;第一节 微生物的分离和纯培养; 无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染的技术。 它是保证微生物学研究正常进行的关键;1·1 微生物培养的常用器具及灭菌;最常用的灭菌方法;①常压法（间歇灭菌法）：是用蒸汽锅（或普通锅）蒸，温度不超过100℃。每次一小时，共三次，每次间隔24小时（杀死孢子）。;3. 过滤除菌法;对于接种针或其它金属用具灭菌，可直接在酒精灯火焰上烧至红热。此外在接种过程中，试管或三角瓶口，也采取通过火焰达到灭菌的目的。;① 70％的酒精：操作前手或器皿的表面杀菌，载玻片，盖玻片的浸泡等。 ② 1:1000 新洁尔灭溶液，浸泡时间为30分钟，常用于表面的消毒。 ③ 福尔马林（40％甲醛液）：用于空间熏蒸灭菌，加热或加高锰酸钾使其放出甲醛气体。注意将空间密闭并维持24小时。;6. 紫外线灭菌;压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为操作提供无菌环境 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 ;1·2 接种操作 —最基本技术;无菌操作台;一、无菌技术;二、用固体培养基分离纯培养;菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。; ????????????????????????????????????????? ;放线菌在固体培养基上形成与细菌不同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落。;二、用固体培养基分离纯培养; 纯种微生物的分离;培养平板（culture plate）;纯种微生物的分离方法;稀释倒平板法;;2. 涂布平板法;;3. 平板划线法;4. 稀释摇管法(dilution shake culture method） ;厌氧微生物分离装置：;三、用液体培养基分离纯培养;四、单细胞分离;五、选择培养分离;2 富集培养;六、二元培养物;七、微生物的保藏技术;菌种保藏方法;第二节 显微镜和显微技术;一、显微镜的种类及原理;1. 普通光学显微镜;显微镜的分辨率与放大倍数;显微镜的几个光学特点;2.暗视野显微镜;3、相差显微镜;1·4 荧光显微镜;5、透射电子显微镜（简写TEM）;6、扫描电子显微镜（SEM）;7、扫描隧道显微镜（STM）; 厨房抹布上的细菌和霉菌;;二、显微镜和显微技术;二、显微镜和显微技术;特点：避免染色对细胞结构的破坏，用于运动性、摄食特性、生长繁殖过程中形态变化等观察 。 压滴法：菌悬液滴载玻片，加盖玻片直接观察； 悬滴法：盖玻片滴一滴菌悬液，反转置于特制凹载玻片直接观察 ； 菌丝埋片法：无菌小玻璃纸铺平板表面，涂布孢子悬液，培养后，取下玻璃纸置于载玻片，观察 。;活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。染色前需要对样品固定，目的：杀死细菌使菌体黏附在玻片上；还可增加对染料的亲和力。 常用方法：酒精火焰加热和化学固定（ 95%酒精、酒精和醚各半的混合物、丙酮、1—2%的饿酸等）;革兰氏染色法;大肠杆菌革兰氏染色;电镜制样;透射电镜制样;投影技术： 真空蒸发设备将铂或铬等对电子散射能力强的金属原子，由样品斜上方喷镀，提高样品反差。可用于病毒、细菌鞭毛、离体细胞器、蛋白质和核酸等观察。 超薄切片技术： 微生物个体虽小，微弱电子束无法透过整体标本，需制成100纳米以下的超薄切片才能看清内部细微结构。基本操作过程：取样、固定、脱水、浸透与包埋、切片、捞片、染色、观察。;浸没油与玻璃的折射率相近;负染色技术和投影技术