靶向奶牛Lepr基因的miR-30d报告基因载体构建及靶向验证.pdfVIP

???????????????研 究 报 告? 省 畜 牧 业 科 技 园 区 ?。? 对 照 来 校 正 各 组 之 间 的 差 异 ．具 体 实 验 分 组 如 下 ?表? ?．? 方 法? ??所 示 ? 转 染 时 重 组 质 粒 载 体 与 ??? ????：? 质 粒 的? ?．?．?? 靶 基 因 预 测 与 引 物 设 计 ? 加 入 量 约 为 每 孔 ??????和 ??????， 转 入 质 粒 与 转 染 试 ? 运 用 生 物 信 息 学 方 法 进 行 预 测 。在 ??????????中 ，? 剂 的 加 入 量 比 为 ?：?．具 体 操 作 根 据 ??????????????????? 检 索 牛 ?????这 一 物 种 中 ????是 否 ．％???? ?????的 生 物 ? 说 明 书 进 行 ? 细 胞 转 染 后 ???更 换 新 鲜 的 培 养 液 ，转 染 ? 信 息 学 预 测 靶 基 因 。 根 据 预 测 ，针 ????????? ?????中? ????后 收 集 转 染 细 胞 用 于 荧 光 素 酶 活 性 的 检 测 。? 编 码 ????基 因 ??? ?的 ?’??? 中 包 含 有 上 述 靶 向 结 ? 表 ? 细 胞 转 染 实 验 分组? 合 位 点 的 ??????目标 序 列 进 行 引 物 设 计 ，并 在 引 物 中? 平行 孔? ?组? ?组? ?组? 引 ? ?????和 ???????两 酶 切 位 点 及 其 各 自 酶 切 位 点 的 ? ?? 重组质粒载体 重组质粒载体?????一???重组质粒载体????一???? 保 护 碱 基 ．引 物 由 上 海 英 俊 公 司 负 责 合 成 。? ?? 重组 质 粒载 体 重组 质 粒载 体?????一???重 组质 粒 载体 ?????一???? ?．?．?? 总 ? ??的 提 取 与 逆 转 录? ?? 重组 质 粒载 体 重组 质 粒载 体?????一???重组 质粒 载体 ????一???? 取 出 液 氮 中 预 先 冻 存 的 荷 斯 坦 奶 牛 乳 腺 组 织 ．采 ? ?．?．?? 荧 光 素 酶 活 性 检 测? 用 液 氮 研 磨 法 并 按 照 ?????????????????????提 取 说 明? 转 染 ????后 按 照 ???????公