诱导子对茶条槭悬浮细胞核酸酶的激活研究.pdfVIP

中国展亏c亟强 2012，28(25)：27—31 Chinese Agricultural Science Bulletin 诱导子对茶条槭悬浮细胞核酸酶的激活研究 齐凤慧，詹亚光 (东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040) 摘 要：为揭示真菌诱导子诱导茶条槭悬浮细胞发生凋亡的原因，以茶条槭悬浮细胞为材料，采用细胞形 态观察、基因组DNA电泳分析以及核酸酶活性检测等手段 ，研究了真菌诱导子对细胞发生凋亡的影 响。结果表明，真菌诱导子处理的细胞，其形态结构发生变化，DNA降解呈梯状的条带，且检测到分子 量大约为50、40、41、38、34 kDa的核酸酶。通过这些结果说明，茶条槭悬浮细胞在真菌诱导子诱导下发 生细胞凋亡，并伴有特异核酸酶被激活。 关键词 ：茶条槭 ；悬浮细胞 ；细胞凋亡 中图分类号：Q942．6 文献标志码：A 论文编号：2012—1290 The Study of Nuclease Activated by Elicitors in Cell Suspension of Acerginnala Qi Fenghui，Zhan Yaguang (School ofLire Science，Northeast Forestry University，Harbin 150040) Abstract：The aim was to reveal the reason causing apoptosis of Acer#．nala cel co-cultured with a fungal elicitor．The microscope observation，genomic DNA electrophoresis and nuclease activity test was used to investigate the apoptosis of cell suspension．It was observed from the microscope that the shape and structure of the cells altered signifcantly．The genomic DNA of induced cells ran a ladder graph on the lane of gel electrophoresis and then smeared on the lane when the cells died．It was also detected that the nucleases of the cell were activated after induced．Specific bands with the size of 50，40，41，38 and 34 kDa were detected on the PAGE．The fungal elicitor activates nucleases to degrade the genomic DNA，and bring the cels to apoptosis eventually． Key words：Acerginnala；cell suspension；apoptosis 0 引言 细胞凋亡是多细胞生物体在发育过程中或在某些环 境因子的作用下发生的受基因调控的主动死亡方式 。 细胞凋亡的特征具有明显的形态学改变，包括细胞膜 通透性增加，细胞皱缩，线粒体膜电位下降，染色体凝 聚和DNA片段化等 。结合相关的特征可以采取不同 的检测方法，如DNA特异性染料(如Hoechst33342、 Hoechst33258和DAPI等)可以与DNA的AT碱基区进 行非嵌入式结合，从而使细胞核着色，在紫外光激发时 会出现明显的荧光 ；提取凋亡细胞的基因组DNA，经 琼脂糖电泳后可观察到不同倍数的梯状DNA条带，即 DNA ladder：也可以利用分子生物学和免疫组织化学 相结合 的TUNEL检测法 ；线粒体膜 电位 的检测 、 caspases家族基因表达检测等 。目前植物细胞凋亡 机理还不是很清楚，近来研究发现，植物细胞中存在类 似于动物细胞凋亡的过程 ]，并发现植物细胞凋亡中 有不同理化性质核酸酶的激活，包括烟草、大豆、豇豆、 番茄、白云杉、拟南芥等植物的过敏性反应中发现有脱 基金项 目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目“茶条槭没食子酸合成途径的关键酶cDNA差异表达研究”；中央高校基本科研业务费专项 资金资助“诱导子诱导茶条槭悬浮细胞凋亡相关信号差异的研究”(DL10BA13)。 第一作者简介：齐风慧，女，1976年出生，副教授，博士，主要从事植物细胞工程、基因工程教学与研究工作。通