沙冬青AmDREB1F基因的克隆与表达载体构建.pdfVIP

2014年 7月 内蒙古大学学报 (自然科学版) JuL 2014 第45卷第4期 JournalofInnerMongoliaUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．45 No．4 文章编号：i000—1638(2014)04—0378—07 沙冬青AmDREBIF 基因的克隆与表达载体构建 董 博 ，王茅雁 ，王学峰 ，张 锋 ，武雅琪 (内蒙古农业大学生命科学学院，呼和浩特 010018) 摘要：DREB(dehydrationresponsiveelementbindingprotein)类转录因子在植物耐逆性中起 重要作用．利用RNA—Seq技术从蒙古沙冬青 (Ammopiptanthusmongolicus)中鉴定出一个受 低温和干旱强烈诱导的DREB基因，并用 PCR方法克隆到其完整编码 区的cDNA和 gDNA． 二者均 由726bp组成 ，故无 内含子．推测其蛋 白产物含 241个氨基酸残基和 1个保守的AP2 结构域及核定位信号，很可能定位于细胞核．因为与拟南芥等植物DREB1F蛋 白同源性较高， 故将该基 因命名为AmDREB1F．将其编码 区 cDNA片段成功构建到植物表达载体 pCAM— BIA33Ol上 ，为进一步研究其功能奠定了基础 ． 关键词 ：沙冬青；DREB；表达分析；基因克隆；载体构建 中图分类号：Q78 文献标志码：A 植物通过一系列分子水平的变化来响应和抵抗干旱、低温及高盐等不 良环境．长期以来 ，人们试 图揭示植物耐逆性的分子机理 ，并寻找各种途径来提高植物的耐逆性．目前认为 ，植物对各种非生物 逆境 的耐性通常是由许多基因和基因家族共同作用的结果．逆境胁迫往往通过植物体 内一系列信号 传递途径诱导相关转录因子表达 ，这些转录因子又通过与下游靶基因启动子 区域的顺式作用元件发 生特异性结合 ，从而激活或抑制这些基因的表达 ，使植物产生各种耐逆机制[1]．因此，克隆和鉴定更 多的转录因子基因已成为植物耐逆性研究者的共识 ，人们希望通过增加或改变个别关键转录因子 的 调控能力从而提高植物的耐逆性能． 目前发现许多转录因子家族如 AP2／EREBP(APETALA2／ethyleneresponsiveelementbinding protein)、bZIP、NAC、MYB、MYC、WRKY 和 C2H2型锌指蛋 白与植物耐逆性密切相关r1]，其 中 AP2／EREBP大家族中的DREB(dehydrationresponsiveelementbinding)亚族在提高植物耐逆性中 发挥重要作用 ]．这类转录因子能够与许多干旱和低温诱导基 因启动子中的DRE／CRT(dehydra— tionresponsiveelement／C—repeat)顺式作用元件特异性结合 ，从而增强这些基因的表达，介导植物对 多种非生物胁迫产生耐性l4]．已鉴定的DREB类转录因子主要可分为 DREB1／CBF和 DREB2两种 类型，其 中前者主要受低温胁迫的诱导 ，而后者主要受干旱和高盐胁迫的诱导．将某些 DREB基 因， 如拟南芥 DREB1B／CBF1和DREB1A／CBF3、大豆 GmDREB2和小麦 TaDREB2转入油菜、水稻 、 杨树和小麦等植物，可显著提高其对低温、干旱和／或盐胁迫 的耐性_3 ．最近 Wang等报道，水稻 DREB1F可提高转基因拟南芥和水稻对干旱、低温及盐胁迫的耐性，该基因也可能参与依赖ABA * 收稿 日期 ：2013—05—12；修 回 日期 ：2013—11～11 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(No；内蒙古 自然科学基金重大项 目资助(No．2012ZD02) 作者简介 ：董 博 (1988一)，男，内蒙古 自治区呼和浩特人 ，2011级硕士研究生．E—mail：5958490@ 163．corn． 通信作者：王茅雁 (1961一)，女，内蒙古 自治区呼和浩特人，教授，博士．主要从事植物抗逆分子生物学研究 E-mail