海滨雀稗液泡膜H^＋-PPase（PvVP1）5′端的克隆和序列分析.pdfVIP

１６８－１７４ 　　　草　业　学　报　　　 第２３卷　第５期 ２０１４年１０月 　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　 Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．５ 海滨雀稗液泡膜 犎＋犘犘犪狊犲（犘狏犞犘１） ５′端的克隆和序列分析 宋辉１，南志标１ ，蔡小宁２，钟小仙３，顾洪如３ （１．草地农业生态系统国家重点实验室 兰州大学草地农业科技学院，甘肃 兰州 ７３００２０；２．南京晓庄学院生物化工与 环境工程学院，江苏 南京 ２１１１７１；３．江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏 南京 ２１００１４） 摘要：根据??公布液泡膜 Ｈ＋ＰＰａｓｅ基因家族同源序列保守区设计简并引物，克隆出海滨雀稗中 犘狏犞犘１基因的中 间序列，然后用快速扩增ｃＤＮＡ 末端（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄ，ＲＡＣＥ）方法，从海滨雀稗中克隆到犘狏犞犘１ ５′ｃＤＮＡ 序列。该序列 ＯＲＦ长１６０５ｂｐ，编码５３５个氨基酸，其编码序列、氨基酸序列与玉米相应基因的同源性分 别为９３％和９９％。 关键词：海滨雀稗；液泡膜 Ｈ＋ＰＰａｓｅ；ＲＡＣＥ；耐盐 中图分类号：Ｑ９４３．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１４）０５０１６８０７ 犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘ　 　　焦磷酸酶（ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＰＰａｓｅ，ＥＣ３．６．１．１）是以焦磷酸为底物的水解酶，该酶广泛地存在于自然界中， 参与合成糖类、核酸和蛋白质等多种代谢途径中所形成的焦磷酸的水解。ＰＰａｓｅ通常分为２类，一类是存在于细 胞质和细胞器基质中的可溶性酶类，即无机焦磷酸酶（ｉｎｏｒｇａｎｉｃｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）；另一类是与膜结合的不可溶 性酶类，也就是膜结合焦磷酸酶（ＶＰＰａｓｅ）［１］。植物中主要存在３种质子泵（Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ），即位于细胞质膜上的 Ｐ型质子泵（ＰＡＴＰａｓｅ）、液泡膜上的 Ｖ 型质子泵（ＶＡＴＰａｓｅ）和 Ｈ＋转运无机焦磷酸酶（Ｈ＋ＰＰａｓｅ）［２］。在盐胁 迫条件下，植物 ＶＨ＋ＡＴＰａｓｅ和 ＶＨ＋ＰＰａｓｅ一起为液泡膜 Ｎａ＋／Ｈ＋ 逆向转运蛋白提供质子驱动力，将细胞 质中过多的 Ｎａ＋ 区域化于液泡中，从而减轻 Ｎａ＋ 的毒害［３］。 ［］ ［］ ２０世纪５０年代，Ｋｕｎｉｔｚ４ 首次从酵母中纯化到无机焦磷酸酶，随后，Ｋａｒｌｓｓｏｎ５ 从甜菜（犅犲狋犪狏狌犾犵犪狉犻狊）根的 ［］ 膜制剂中分离到钾激活的 ＶＰＰａｓｅ。但是，直到１９９２年，Ｓａｒａｆｉａｎ等 ６ 才从拟南芥（犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）的ｃＤ ＮＡ 文库中第一次克隆出完整的液泡膜 Ｈ＋ＰＰａｓｅ的ｃＤＮＡ 序列，命名为 犃犞犘１（Ｍ８１８９２）。随后，研究者发现， 大多数陆生植物 Ｈ＋ＰＰａｓｅｃＤＮＡ 含有２２８３～２３１９个核苷酸的开放阅读框架（ＯＲＦ），编码大约 ７６１～７２２个氨 基酸残基，计