通用型植物表达载体pCamE的构建及功能验证.pdfVIP

? 篓融一一? ???????? 辙戮熊髓麟?帮? ●? ? 攀?????：赫????：／／????????????????????? 昂籀『?? ：热复：? 通用型植物表达载体?????的构建及功能验证? 吴立 柱 王省 芬 李喜 焕 马峙 英? 教育部华北作物种质资源研 究与利用 重点实验室／河北农业大 学生命科 学学 院，保定 ??????? 通讯作者，??????????．???．??? 摘 要 为 了探 索 通用 型植 物 表达 载 体 的 快捷 构 建 ，本研 究通 过 ???克 隆 、酶切 连 接 和 ???扩 增 获 得? ????????启动子 序列 及 ?????多 克隆位 点部 分 限制性 内切 酶位 点和 ???终 止子 ，构 建成 完整 的表达 组? 件 ，并 将 该 组 件插 入 ???????????的 多克 隆 位 点 ，构 建 成 通 用 型植 物 表 达 载 体 ?????????????登 录? 号 ：?????????。?????表达 组件 的启动 子 上游 、多克 隆位 点和 终止 子 下游 分 别含 有 ?、?和 ?个 单 拷 贝 限? 制性 内切 酶位 点 ，利 于外 源基 因 的克 隆和插 入 以及 对 载体 启动 子或 终止 子 的修 饰 和更换 。 以绿色 荧 光蛋? 白基 因??????????????????????????????????，?????为 报 告基 因 ，分 别 构 建 了表 达 载体 ????：：???、????：：? ，? ?和 ????：：?????????，转 化 洋 葱? ????????????．?表 皮 细 胞 和 拟 南 芥? ?????????????????????．?，绿? 色 荧光 蛋 白???????融合 蛋 白 ?????—???在 洋 葱表 皮 细胞 中均成 功 稳 定表 达 ；在 ????：：???转 基 因拟? 南芥株系的根、根尖、根毛、茎表皮毛、幼叶基部、叶柄微管组织和未成熟花药等组织均能观察到强烈的绿? 色 荧光 。表 明 ，植 物表 达 载体 ?????是 可 将 不 同 目的基 因与植 物 染色 体 整合 并 稳 定遗 传 的通 用 型植 物? 表达 载体 ，不受 外源 片段 大 小及 插入 位 点 的影 响 ，具 有经 济 实用 、适 用 广泛 、操 作 简便 和 外源基 因在转 基? 因植 物 中遗传 稳定且 正 常表达 等特 点 。该载 体可 用 于不 同基 因和不 同功 能表 达载 体 的快捷 构建 ，为植 物? 的遗 传转 化和 基 因功能研 究提 供 了新 的通 用 型基 因表 达载体 工 具 。? 关键 词? 植 物表 达载 体 ，???????，限制 性 内切酶 位 点 ，绿色 荧光 蛋 白?