DNA损伤修复与抗肿瘤药物研究教程.ppt

冯冰虹教授;2;突变的意义;*;一、引起DNA 损伤的因素;DNA损伤的后果;（一）DNA 的自发性损伤;（二）环境造成的DNA 损伤;*;*;*;二、DNA 损伤的类型;1. 碱基和糖基破坏;2. 错配;3. DNA链断裂 ;4. DNA交联 ;DNA交联示意图;第二节 DNA损伤的修复的机制;常见的DNA损伤及其修复机制 ;修复(repairing) 是对已发生分子改变的补偿措施，使其回复为原有的天然状态。;二、DNA损伤的修复的机制;光修复酶(photolyase);;● 嘌呤直接插入 ● O6-甲基鸟嘌呤-DNA的甲基转移 ● 单链重接（单链断裂修复）;*;（二） 切除修复 ;2.1碱基切除修复（base-excision repair, BER） ;DNA分子中一旦产生了AP位点，AP核酸内切酶就会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开，并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA，由DNA聚合酶I合成新的片段，最终由DNA连接酶把两者连成新的被修复的DNA链→碱基切除修复(base-excision repair)。 ;.糖甘水解酶识别改变了的碱基，把碱基从N-β-糖苷键处切下来，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点，统称为AP位点。;由AP磷酸内切酶将受损核甘酸的糖苷-磷酸键切开; DNA连接酶连接;*;● 核苷酸切除;2.2核苷酸切除修复（Nucleotide excision repair, NER） ;2.2核苷酸切除修复（Nucleotide excision repair, NER） ;识别损伤部位;（三） 重组修复 ;*;复制中出现损伤;*;（四）错配修复（mismatch repair，MMR） ;原核生物利用甲基化区分old strand 和new strand，因此原核细胞中的错配修复也称甲基化指导的错配修复（methyl-directed mismatch repair）。;错配修复系统识别母链靠Dam甲基化酶（Dam methylase），它能使位于5’GATC序列中A的N6位甲基化。一旦复制叉通过复制起始位点，母链就会在开始DNA合成前的一小点时间（几秒钟至几分钟）内被甲基化。刚合成的DNA新链上的GATC序列还没有来得及甲基化，而作为模板的old strand早已被甲基化了，利用这种差别区分old strand 和 new strand。 ;此后，一旦发现错配碱基，错配修复系统就会根据“保存母链，修正子链”的原则，找出错误碱基所在的DNA链即将未甲基化的链切除，并以甲基化的链为模板进行修复合成。 GATC中A甲基化与否常用来区别新合成的链（未甲基化）和模板链（甲基化） 。这一区别很重要 ;错配修复（mismatch repair）; 根据母链甲基化原则找出错配碱基的示意图; 甲基化指导的错配修复示意图;（五）SOS修复 ;SOS修复中LexA-RecA操纵子的作用机理;当细菌DNA遭到破坏时，细菌细胞内会启动一个被称为SOS的诱导型DNA修复系统。 在正常情况下，DNA损伤的修复基因的操纵子被LexA蛋白所阻遏。 SOS修复系统受到LexA阻遏蛋白的抑制，平时该蛋白表达水平很低。 SOS体系的诱导表达过程其实就是LexA阻遏蛋白从这个基因的上游调控区移开的过程。;当有紫外线照射时，细菌体内的RecA蛋白水解酶被激活，催化LexA阻遏蛋白裂解失活，从而导致与DNA损伤修复有关的基因表达。 RecA蛋白：是SOS反应的最初的发动因子。在单链DNA和ATP存在时，RecA蛋白被激活，表现出水解酶活性，分解LexA阻遏物。 ;表达RecA蛋白与这些缺口处单链DNA相结合，被激活成蛋白酶。具有蛋白酶活性的RecA蛋白将LexA蛋白切割成没有阻遏作用的和具有与操纵区DNA结合活性的两个片段，导致SOS体系的高效表达，使DNA得以修复。 ;SOS反应; 当修复完成后，活化信号消失，RecA蛋白回复到非蛋白水解酶的形式，LexA蛋白开始逐步积累，并重新建立起阻遏。RecA蛋白的合成停止，DNA恢复复制，RecA蛋白被稀释到原来的本底水平。;三、 DNA 修复的细胞周期检查点控制; 酵母细胞的细胞周期检查点控制机制;哺乳类动物的细胞周期检查点控制机制;四、DNA损伤应答的研究进展 ; T i p 6 0可以p 5 3依赖和不依赖两种方式参与 D N A损伤应答：;（二）调控 D N A损伤修复基因的miRNA;;;第三节 DNA损伤和修复的基因;一、甲基化损伤修复相关基因;二、切除修复相关的酶和基因;三、错配修复相关基因;四、 DNA聚合酶β;五、 DNA加合物;DNA损伤和修复的生物学意义;第四节 与DNA修复有关的人类遗传疾病;;着色性干皮病(Xeroderma pigmento