猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证.pdfVIP

????年 ??月? 中 国实 验 动 物 学 报? ????? ????????? 第 ??卷 第 ?期? ??????????????????????????????????????????? ??????? ??．?? 猪胰 岛素启动子调控 ????表达载体 的? 优化及体外验证? 于淑珍? ，冯冲?，石 宁宁?，宋小凤?，潘登科? ??．中国农业科学院北京畜牧兽 医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新 重点实验 室 ，北京? ??????；? ?．四 川?农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ，四川 雅 安 ???????? 【摘要 】? 目的 获得猪胰岛素启动子调控外源基 因的高效表 达载体 ，为制 备转基 因猪胰 岛特异性 表达 目的? 基 因奠定基础 。方法 利用猪胰岛素启动子 ????，包 含 ??调控 区 、第 一外显 子 、第一 内含 子及第 二外显 子 ???前? 的序列共 ?．?????构建表达载体 ，连接 ???和 ????的酶 切位 点 ????Ⅲ设计 在起 始密码 子前 ，命 名为 ???．???????．? ????。鉴于酶切位点 的插入位置 可能会影 响外 源基 因的表达效 率 ，对载 体进行 了优 化 ：将 ???????酶切 位点删 除 ，? 实 现 ???和 ????无 缝 连 接 ，载体 命 名 ???—????；将 第 一 内含 子 ??端 的 内含 子 剪 接 受 体 位 点 ???????????????????????，? ???突变为 ???????内切酶识 别位 点 ，命名为 ???．??????????。三种载体分别 电转染小 鼠胰 岛素瘤 ?细胞株 ???一? ?细胞 、猪耳成纤维 细胞 以及猪 肾细胞 ，????后通过荧光强 度、流式分 析 、??．???及 ????????????检测 ，验证载体 的? 表达效率 。结果? 转染 细胞后 ，三种载体都仅在 ?????胰 岛 ?细胞表达绿 色荧光 。??????及其产 物测序结 果显? 示 三种 载体 的胰 岛素启动子第 一 内含 子 的剪切存在 差异 ：载体 ???．???????．????和