特殊显微镜的工作原理和使用学案.ppt

第六章;;一、 暗视野显微镜;(一) 原理和结构特点 ;;明场普通显微镜成像光路图;;成像特点及优缺点;(二) 制作中央遮光板 ;（三）使用方法;要求与注意事项;暗视野显微镜下的植物胚珠受精过程;;（二）相差显微镜;原理和结构特点;;;成像光路图;相差显微镜的构造特点;;;使用方法 （1）相差装置的调换安装 卸下普通显微镜使用的聚光器，将环状光阑装在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸收红色和蓝色光，使波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果。再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。 （2）调焦 打开光源，旋转集光器转盘，将“0”对准标示孔，使普通聚光器部分进入光路。先使用低倍相差物镜，按普通显微镜操作方法进行对光和调焦。 旋转环状光阑，使光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相适应，如相差物镜为40X时应用40X标示孔的光阑。;（3）合铀调整 拔出目镜，插入合铀望远镜，一边从望远镜向内观察，并用左手固定其外筒；一边用右手转动望远镜内筒使其上升，当对准焦点就能看到环状光阑的亮环和相板的暗环，此时可将望远镜固定住。再升降集光器并调节其下的螺旋使亮环的大小与暗环一致，然后左右前后调节环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重合。 （4）观察 换回目镜，按常规要领进行观察。在更换不同倍率的相差物镜时，每一次都要使用相匹配的环状光阑。 ;用途;用途：观察未经染色的玻片标本;用途;三、微分干涉差显微镜;微分干涉差显微镜;原理;原理;微分干涉差显微镜的装置：;微分干涉差显微镜的调节步骤：;应用;应用;注意事项：;四、荧光显微镜;荧光概念;荧光的性质： 吸收光，必需有激发光源 荧光波长＞激发波长（损失热能） 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 ;荧光的产生;荧光显微镜原理;荧光显微镜结构特点;不同照明方式下荧光显微镜主要部件;光源;滤色系统;;基本色调;1．激发滤板　;2．压制滤板;各种滤色镜;反光镜;聚光镜;物镜;目镜;照明装置;2．落射式荧光显微镜;;;荧光显微???标本制作要求;使用方法;使用荧光显微镜的注意事项;荧光的衰减;荧光图像的记录方法;荧光显微镜的应用范围;各种标记荧光素的特性;优点： 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析; WU;FITC+Texas Red+DAPI;原位杂交技术;;五、偏光显微镜;自然光— 普通光源发出的光,在垂直于传播方向的平面上,所有可能方向的光矢量E 的振幅都相等。 线偏振光--光矢量只在某一固定的方向上振动。 ;横波的偏振性;寻常光线(o光):遵守折射定律。对于晶体一切方向都具有相同的折射率，且在入射面内传播。 非常光线(e光):不遵守折射定律。它的折射率随方向而变化，并且不一定在入射面内传播 。 o光和e光都是线偏振光,且振动方向相互垂直;二向色性：某些晶体（电气石、硫酸金鸡钠碱晶体等）对光振动有强烈的选择性吸收能力，这种性质称为二向色性。如电气石晶体对自然光的某一振动方向上的光振动几乎完全吸收，而垂直于该方向的光振动只稍微减弱后通过。 旋光现象：线偏振光通过某些透明介质后，它的光振动方向将绕着光的传播方向旋转某一角度? 的现象，称为旋光现象。这种介质称为旋光物质。如石英、糖、酒石酸钾钠等。;偏光显微镜的基本原理：;偏光显微镜的基本原理：;起偏振镜和检偏振镜;尼科耳棱镜光路图;;起偏和检偏;当两个偏振镜振动轴平行时，起偏振镜A产生的偏振光可以完全通过B检偏镜； 当A、B振动轴成一定角度时，A产生的偏振光只有部分能通过检偏镜B， 而当A与B的振动轴垂直时，A产生的偏振光完全被B阻挡，产生消光现象。;偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化;偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化;偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化;偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化;如果是圆偏振光，用检偏振镜检查时不发生消光现象，光的强度不发生变化。 如果是椭圆偏振光，用检偏振镜检查量不发生消光现象，但光的强度要发生变化， 当B的振动轴与椭圆长轴重合时，光的强度最大，与椭圆的短轴重合时，光的强度最小。;偏光显微镜;偏光显微镜必须具备以下附件：;偏光镜检术的方式：;偏光镜检术的要求：;偏光显微镜在装置上的要求：;偏振光装置的调整及使用;;偏光显微镜的照明:;在生物领域应用：;偏光显微镜的成像光路图;花粉粒简易偏光效果 ;淀粉十字偏光效果图 ;;六、倒置显微镜;结构和使用特点：;倒置显微镜操作步骤;倒置显微镜应用;显微操作;显微操作仪;七、解剖显微镜;其特