甘蓝型油菜固醇载体蛋白2基因BnSCP-2的克隆与表达.pdfVIP

中国油料作物学报 ２０１５，３７（１）：００９－０１４ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１５．０１．００２ 甘蓝型油菜固醇载体蛋白 ２ 基因 ＢｎＳＣＰ－２的克隆与表达 楚　璞，翟丽娜，管荣展 （作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京农业大学，江苏 南京，２１００９５） 　　摘要：固醇载体蛋白 ２（ＳＣＰ－２）是一类小分子碱性蛋白，参与细胞内脂质运输、脂肪酸代谢以及过氧化物酶 体 β－氧化等过程。利用同源序列设计引物进行 ＰＣＲ扩增，克隆得到甘蓝型油菜固醇载体蛋白 ２基因的 ｃＤＮＡ序 列，命名为 ＢｎＳＣＰ－２。ＢｎＳＣＰ－２的开放阅读框长 ３７２ｂｐ，编码一个由 １２３个氨基酸残基组成的蛋白质，预测的蛋 白质相对分子质量为 １３．５２ｋＤ，等电点为 ９．３５。ＳＣＰ－２蛋白氨基酸序列非常保守，系统进化分析表明 ＢｎＳＣＰ－２ 与拟南芥 ＳＣＰ－２同源性最高。荧光实时定量 ＰＣＲ结果表明 ＢｎＳＣＰ－２在检测的各个组织均有表达，其中花和花 蕾中的表达量最高；赤霉素、细胞分裂素和脱落酸等可显著诱导幼苗中该基因的表达，推测该基因可能参与调控幼 苗生长发育。 关键词：甘蓝型油菜；固醇转运蛋白 ２；ＢｎＳＣＰ－２基因；克隆；基因表达 中图分类号：Ｓ５６５．４０３；Ｑ７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１５）０１－０００９－０６ Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｅｒｏｌｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎ２ｇｅｎｅｆｒｏｍ Ｂｒａｓｓｃｉａｎａｐｕｓ ＣＨＵＰｕ，ＺＨＡＩＬｉ－ｎａ，ＧＵＡＮＲｏｎｇ－ｚｈａｎ （ＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＬａｂｏｆＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ， ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｅｒｏｌｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎ２（ＳＣＰ－２）ｉｓａｓｍａｌｌ，ｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｉｎｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｉｐｉｄｃｉｒｃｕｌａ ｔｉｏｎ，ｆａｔｔｙａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌβ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅ，ａｃＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｏｆ ＳＣＰ－２ｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ，ａｎｄｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓＢｎＳＣＰ－２．ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＢｎ ＳＣＰ－２ｉｓ３７２ｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ１２３ａｍｉｎｏａｃｉｄｗｉｔｈａｐｒｅｄｉｃｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆ１３．５２ｋＤａｎｄａｐＩｏｆ ９．３５．ＴｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｏｆＳＣＰ－２ｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｄｅｄｕｃｅｄＢｎ ＳＣＰ－２ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｃｌｏｓｅｔｏＳＣＰ－２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴ－ＰＣＲｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＢｎＳＣＰ－２ｗａｓｅｘ ｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｔｉｓｓｕｅｓｔｅｓｔｅｄ，ｗｉｔｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｆｌｏｗｅｒｓａｎｄｆｌｏｗｅｒｂｕｄｓ．Ｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｓｅｅｄｌｉｎｇｓｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙＧＡ３，６－ＢＡａｎｄＡＢＡｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔＢｎＳＣＰ－２ｍａｙｂ