肝素酶的原核表达与表达条件优化.pdfVIP

第 ??卷第 ?期? 泉州 师 范学 院学报? ???．?????．?? ????年 ?月? ?????????????????????????????????????? ???．????? 肝素酶的原核表达与表达条件优化? 杨 嫦 娇 ，郑 丽 燕 ，吴 文林? ?泉 州 师 范 学 院 化 学 与 生命 科 学 学 院 ，福 建 泉州? ???????? 摘? 要 ：利 用 ???技 术 从 肝 素 黄 杆 菌 克 隆 到 肝 素 酶 ????基 因 ，通 过 双 酶 切 将 其 克 隆 到 原 核 表 达 载 体? ????一??一?中 ，转 化 大 肠 杆 菌 ?．?????????感 受 态 细 胞 ，获得 基 因工 程 重 组 菌 ．??℃ 下 ????诱 导 表 达 ????，? ????????????????????????纯 化 后 获 得 较 高 纯 度 的 ????酶 蛋 白．? 关 键 词 ：肝 素 酶 ????；重 组 ；表 达 ；纯 化? 中图 分 类 号 ：?????．??? 文 献标 识码 ：?? 文 章 编 号 ：????—????????????—????—??? 肝素 ????????，???因其 在肝 中大 量存 在 而得名 ，是 一 类 长链 糖 胺 聚 糖 ，由硫 酸 化 的 葡萄 糖 胺 和 己? 糖醛 酸 以 ???，?糖 苷键 交叉 连接 组合 而成 ．肝 素 在机 体 内能 与 多种 蛋 白质 相 互作 用 而具 有 多 种 生 物 功? 能 ，如抗凝 血 、抗炎 和 抑制肿 瘤 转移 等．肝 素分 子量 为 ?????～??????道 尔 顿 ，仅 低分 子 的 ?／?部 分 有较? 强 的抗凝 作用 ．为 此 ，近年 国 内外 对低 分 子肝 素 的 开 发 十分 重 视 ，希 望通 过 化 学 降解 或 酶 解 的方 法 将 肝? 素 降解成 平 均分 子 量 在 ?????～ ?????道 尔 顿 的低 分 子 量 肝 素 ?????????????????????????????，???—? ? ??，由于其分 子量 较小 ，不 易被 血小 板第 Ⅳ 因子 中和 ，增 强 了抗凝 效果 和 纤溶 作用 ，同时抗 血 小 板 、诱? 发 出血 的副 作用大大减少 ，几乎对脂 质 的代谢 没有 影 响 ，因而 倍受 临床 青 睐．目前 广泛 用 于心 血管 疾 病和? 血液 透析．? 肝 素酶 ?????????????是 多糖 裂解 酶 ，作 用 于肝 素 或者 硫 酸 乙 酰肝 素 ?????????????????，可 以将 大 分? 子 肝素 降解 成低 分子 量 肝素 ，由 ?????等 ¨?在 肝素 黄杆 菌 ??????????????????????????中首 次 发现 ．此? 后 ，人 们对 肝素 酶 以及肝 素酶 生产 菌作 了广 泛 的研 究 ．目前 已从肝 素 黄 杆 菌 中发 现 ?种 肝素 酶 ：????、? ?????和 ?????????．??? ? 的生 产通 常有 化 学裂解 法 和酶 法口?．酶法 生产 ???? 具有 低 能耗 、无 污? 染 、安 全性 高 的优点 ，但 也存 在成 本过 高 的缺点 ，主要 是 野生 菌生产 肝 素酶 的产 量极低 ，而 且需 要价 格 昂? 贵 的肝 素诱 导? ?，由此导致 其 在生产 上 的使用 受 到较 大 的 限制