高效热不对称交互式PCR技术克隆地黄基因.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 河 南师 范 大 学 学 报 ?自然科 学版 ?? ?．??? ? ?．?? ????年 ?月? ???????????????????????????????????????????????????????????? ???．????? 文章 编号 ：????～????????????— ????— ??? 高效热不对称交互式 ???技术 克隆地黄基 因? 周延清?，王婉 砷?，张? 喻?，李静 云?，陈娟娟?，苑璐璐。，魏? 俊? ??．河 南 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 ，河 南 新 乡 ??????；?．周 口市 科 学 技 术 局 ，河 南 周 口 ???????? 摘? 要 ：利用高效热不对称交互式 ??????????—????技术从地黄基因组中扩增出 ?个 ???片段 ，经过电泳? 检测、回收 、纯化 和测序 获得 ?个 片 段 的碱 基序 列．其 中一 个 由 ???个 ??组 成 ，包 含一 个 ??????的开 放 阅读 框? ?????，编 码 ???个 氨 基 酸 ，与 一 些 已知 纤 维 素 合 酶 基 因在 ??? 水 平 和 氨 基 酸 水 平 的 同 源 性 分 别 高 达 ??? ～ ??? 和 ??? ～ ??? ，而 且 推 测 蛋 白质 具 有 纤 维 素 合 酶 的结 构 域 ；另 一 个 由 ???个 ??组 成 ，没 有 ???，不 编 码 蛋 白质 ，但? 是 ，预 测 其 包 含 启 动 子 元 件 ．这 些 结 果 表 明使 用 ??????????技 术 可 以克 隆 地 黄 基 因 ，克 隆 的基 因将 为 地 黄 基 因分 子? 作用机制和分子育种研究 奠定基础 ．? 关键词 ：地黄；高效热不对称交互式 ???技术；基因克隆；启动子? 中 图分 类号 ：????? 文 献标 志码 ：?? 地黄是 一种 玄参科 地 黄属多 年生 草本植 物 ，分 布 于 中 国、韩 国 和 日本 等地??．在 中 国 ，地 黄分 布 于河 南 、? 山东 、山西 和陕 西等地 ．地 黄块根 是大 宗常 用 中药 材之 一 ，具 有重 要药 用 价 值 、保 健 作 用 和经 济 价 值??．随 着? 分子 生物学 ，尤其 是基 因组 学 的发展 ，地黄 分子生 物学 研究 也得 到 了很 大发展 ，其 中，地 黄基 因克 隆也 取得 了? 可喜 成绩．例如 ，用 ??—???方 法扩 增地 黄肌 动蛋 白基 因片 段??，用 ??? 方 法克 隆 了地 黄 块 根 中 ????—??? 基 因 ????，用 ???技 术 克隆 了怀地 黄基 因片段 及其 中转 座酶基 因???，用 ??—??? 和 ????技术 克 隆怀 地 黄? ???? 和 ????? 基 因???，用 转 录组测序 技术 克 隆地黄代 谢 产物合 成基 因??．但 尚未 见用 ??????????技 术? 克隆 地黄基 因 的报道 ．本研 究用 ??—????—??????技 术克 隆地 黄基 因 ，探 索 地 黄基 因 克隆新 方 法 ，为地 黄 基 因? 分子 作用机 制 和分子 育种研 究奠 定基 础．? ? 材 料 和 方 法? ?．?? 材 料? 怀地 黄 ??— ?种植 于 河南师 范大