第四章酶工程选编.ppt

第四章 酶工程;一、概述;;1）、催化效率高； 2）、专一性强； 3）、反应条件温和； 4）、活力可被调控； 5）、对环境条件比较敏感。;酶学的迅速发展（理论研究） （1） 酶的化学本质 德国化学家R.Willstatter的错误观点。 1926年,美国康乃尔大学的“独臂学者” Sumner（萨姆纳）博士从刀豆中提取出脲酶结晶，并证明具有蛋白质的性质。 1930年，美国的生物化学家Northrop分离得到了胃蛋白酶（pepsin）、胰蛋白酶（trypsin）、胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）结晶，确立了酶的化学本质。;; 酶——是一类由活性细胞产生的具有催化作用和高度专一性的特殊蛋白质。 是否所有的酶都是蛋白质？; (2)核酶的发现 1982年，Thomas R.Cech等人发现四膜虫细胞的26S rRNA前体具有自我剪接功能，将这种具有催化活性的天然RNA称为核酶—Ribozyme。 1983年，Altman等人发现核糖核酸酶P的RNA组分具有加工tRNA前体的催化功能。而RNase P中的蛋白组分没有催化功能，只是起稳定构象的作用。 ; 核酶的发现，改变了有关酶的概念，即“酶是具有生物催化功能的生物大分子（蛋白质或RNA）。 酶分两大类： 主要由蛋白质组成——蛋白类酶（P酶） 主要由核糖核酸组成——核酸类酶（R酶） ;（二) 酶工程研究简史（应用研究） 1894年，日本的高峰让吉用米曲霉制备得到淀粉酶，开创了酶技术走向商业化的先例。 1908年，德国的Rohm用动物胰脏制得胰蛋白酶，用于皮革的软化及洗涤。 1908年，法国的Boidin制备得到细菌淀粉酶，用于纺织品的褪浆。 1911年，Wallerstein从木瓜中获得木瓜蛋白酶，用于啤酒的澄清。; 1949年，用微生物液体深层培养法进行?－淀粉酶的发酵生产，揭开了近代酶工业的序幕。 1960年，法国科学家Jacob和Monod提出的操纵子学说，阐明了酶生物合成的调节机制，通过酶的诱导和解除阻遏，可显著提高酶的产量。 ; 在酶的应用过程中，人们注意到酶的一些不足之处，如：稳定性差，对强酸碱敏感，只能使用一次，分离纯化困难等。 解决的方法之一是固定化。; 固定化技术的发展经历 1916年，Nelson和Griffin发现蔗糖酶吸附到骨炭上仍具催化活性。 1969年，日本千佃一郎首次在工业规模上用固定化氨基酰化酶从DL-氨基酸生产L－氨基酸。 1971年，第一届国际酶工程会议在美国召开，会议的主题是固定化酶。; 二 . 酶工程简介 由酶学与化学工程技术、基因工程技术、微生物学技术相结合而产生的一门新的技术科学。它从应用目的出发，研究酶的产生、酶的制备与改造、酶反应器以及酶的各方面应用。 分为：化学酶工程与生物酶工程。 ;酶工程：利用酶的特异性催化功能或微生物细胞、动植物细胞、细胞器的特定功能，并通过工程化为人类生产有用的产品及提供有益服务的技术。 酶 工程发展所经历的历程： 1）、自然酶的开发应用； 2）、固定化酶和固定化细胞； 3）、多酶 反应器； 4）、仿生技术。;化学酶工程（初级酶工程） 酶化学与化学工程技术相结合的产物。 主要研究内容：酶的制备、酶的分离纯化、酶与细胞的固定化技术、酶分子修饰、酶反应器和酶的应用。 2. 生物酶工程（高级酶工程） 在化学酶工程基础上发展起来的、酶学与现代分子生物学技术相结合的产物。 ;;;二、酶的开发与生产; 2. 产酶微生物的分离和筛选 1)样品的采集:从富含该酶作用底物的场所采集样品 2)富集培养: 投其所好，取其所抗 3)分离获得微生物的纯培养（pure culture）。 4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。 5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。 ;3、产酶微生物优良菌种的选育： 1）、从自然界分离筛选； 2）、人工诱变育种； 3）、遗传工程育种。; 二.微生物发酵产酶方法 1.固体培养:特别适合于霉菌培养 2.液体培养:目前酶发酵生产的主要方式 3.固定化细胞 :需要特殊的固定化细胞反应器 ;三.微生物酶的类型 1.胞外酶：大多是水解酶（如淀粉酶、蛋白酶、 纤维素酶、果胶酶），是微生物为了利用环境中的大分子而释放到细胞外的，即使胞外浓度很高，胞内也能维持较低水平，受到的调节控制少。 2.胞内酶：指合成后仍留在细胞内发挥作用的酶，酶活性和浓度受到中间产物和终产物的调控。;; 植物、