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　　中药研究与开发的论文 【摘要】 目的 研究大黄中5种羟基蒽醌对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。方法 采用ph梯度萃取法从大黄中提取出蒽醌成分,采用体外实验及二分法测定各成分的抑菌效果。结果 大黄中大黄素、芦荟大黄素、大黄酸有抑菌作用,大黄酚与大黄素甲醚无抑菌作用。抑菌效果大黄素最好,芦荟大黄素次之,大黄酸最差。结论 大黄具有抑菌作用。 【关键词】 大黄；金黄色葡萄球菌；二分法 abstract：objective to study the effect of five free anthraquinones of rheum on staphylococcus aureus. method total anthraquinones easured by bisection method. result emodin, aloe-emodin, rhein has the effect of restraining bacterium, chyrsophanol and physcion has not the effect of restraining bacterium. of the effect on restraining bacterium, emodin is the best, then is aloe-emodin, rhein is the has the effect of restraining bacterium. key ；staphylococcus aureus；bisection method 现代药理研究证明,大黄具有抗菌、抗肿瘤、降低血压、健胃、利胆、保肝、强心、延缓衰老、调节免疫功能等作用。.大黄中含有的最主要的5种羟基蒽醌是：大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。本实验主要通过对这5种羟基蒽醌的提取、分离及对金黄色葡萄球菌的抑菌效果进行比较,旨在为大黄在抗菌方面的应用提供一定的实验依据。 1 实验材料 大黄购于沈阳中街新药特药,金黄色葡萄球菌staphy- lococcus aureus 209p购于辽宁省药品检验所。 2 方法与结果　 2.1 大黄总蒽醌的提取[1] 称取25 g的大黄粗粉,置于圆底烧瓶中,先加入50 ml的20%硫酸,再加入125 ml的氯仿,75 ℃回流4 h。 　　2.2 游离蒽醌的分离[2] 本实验采用ph梯度萃取法进行分离。氯仿总提取液50 ml,加ph 8的缓冲液17 ml,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至ph 3,静置,沉淀,抽滤得大黄酸,用冰醋酸重结晶得大黄酸精品。剩余氯仿层加ph 9.9的缓冲液30.5 ml,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至ph 3,静置,沉淀,抽滤得大黄素,用冰醋酸重结晶得大黄素精品。剩余氯仿层加ph 13的缓冲液60 ml,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至ph 3,静置,沉淀,抽滤得芦荟大黄素,用冰醋酸重结晶得芦荟大黄素精品。剩余氯仿层回收氯仿,得大黄酚与大黄素甲醚混合物。 　　2.3 提取物溶液的配制 将各提取物用其相应的缓冲液配制成浓度6 mg/ml的溶液。 　　2.4 大黄中5种游离蒽醌抑菌作用的检验 　　2.4.1 培养基的制备 　　牛肉浸膏0.15%,酵母浸膏0.6%,蛋白胨0.6%,葡萄糖0.1%,琼脂1.8%,ph 6.9～7.1,常水配制。 　　2.4.2 操作过程 　　制备50 ml培养基,灭菌30 min。在超净工作台上,先倒出30 ml至培养皿中,再于50 ℃左右向另外20 ml培养基中迅速加入0.6 ml菌悬液,混匀,倒入同一个培养皿中。待培养基凝固后,分别点上5 μl、浓度为6 mg/ml的各提取物溶液。在37 ℃恒温培养箱中培养10 h,然后进行美蓝染色。量取100 ml 95 %乙醇,加浓盐酸1滴,即为酸性乙醇。量取100 ml 95%乙醇,加氢氧化钠2 g,振摇,待溶解后即为碱性乙醇。取美蓝溶液20 ml倒入平板中,用三角耙涂匀,2 min后倾去,倒入酸性乙醇20 ml,2 min后倾去,倒入碱性乙醇20 ml,2 min后倾去。细流自来水冲洗3 min,倾去并吸干浮水,快速贴上滤纸1张,用三角耙赶走气泡,10 min后揭下滤纸,晾干。5种游离蒽醌抑菌圈直径：大黄酸为5 mm,大黄素为9 mm,芦荟大黄素为3 mm,大黄酚与大黄素甲醚混合物为0 mm。 　　2.4.3 二分法测定各提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度[3] 　　准备16支试管,其中1支作为空白对照组,其余15支平均分成3组,分别代表3种不同的成分,每组分成???、ⅱ、ⅲ、ⅳ、ⅴ号,并用记号笔标明。然后用相应的缓冲液配制成不同浓度的提取物溶液,向试管中加入培养基(配方与2.4.1相同,但不加琼脂),将培养基