人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的作用的论文.docVIP

　　人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的作用的论文 【摘要】 目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因d(xeroderma pigmentosum d,xpd)对肝癌细胞smmc7721增殖的影响，并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染smmc7721细胞，转染重组质粒xpdn2和空载质粒n2，并用未转染的与xpdn2、n2具有相同遗传背景和代数的smmc7721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况，流式细胞仪检测细胞周期，逆转录聚合酶链反应（rtpcr）、yc、cdc25a、cdk2表达量变化，mtt法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pegfpn2xpd用酶切鉴定，与genebank上的相符。在荧光显微镜下，可以在smmc7721pegfpn2、smmc7721pegfpn2xpd细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达，质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示，pegfpn2xpd重组质粒转染入细胞后，肝癌细胞进入s期发生阻滞，停滞在g1期。rtpcr、mc7721pegfpn2xpd细胞与smmc7721pegfpn2和smmc7721两对照组相比，其xpd 表达明 显增高（plt;0.05）。cmyc、cdc25a、cdk2相对表达量明显减少，差异有统计学意义（plt;0.05）。