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FLOW CYTOMETRY;流式细胞术;流式细胞仪简介;流式细胞仪特点;流式细胞仪的分类;BD公司产品 FACS Calibur; FACSAria Ⅲ;FACS Vantage DiVa;Beckman Coulter流式细胞仪;第一节  流式细胞仪－结构组成;液流系统;液流系统;;进样速率控制;光学系统;光学原理;荧光信号;;Longpass Shortpass Bandpass;电子数据系统;电子数据系统构成：;光电检测器(photodetector); 光信号的类型： 散射光信号：与标记荧光素无关， 是细胞的固有参数。 前向散射光(forward scatter, FSC); 侧向散射光(side scatter, SSC). 荧光信号 自发荧光 ：微弱 特异荧光：标记的荧光素分子发出 的荧光，比自发荧光强很多倍。 ;;散射光的作用;流式细胞的主要信息:Fluorescence;Forward scatter (FSC) Side scatter (SSC) FL1-绿色 FL2-黄色、橙色 FL3-红色 FL4-红色;流式常见图形 (Histogram Plot);流式常见图形 (Dot Plot); 假三维图和三维图;等高图和密度图;设门与数据分析;十字门;流式分选;第二节  流式细胞术的科研应用;流式应用常见范围; 样品 培养细胞 新鲜组织 石蜡包埋;实验标本的处理;细胞染色;抗体的选择;实验对照的设计;流式检测应用实例;淋巴细胞表面抗原分析;淋巴细胞细胞内抗原分析;细胞周期分析：;处于不同细胞周期的细胞DNA含量不同，G0/G1期细胞含有二倍体量的DNA，G2/M期细胞含有四倍体量的DNA，而S期细胞DNA含量处于二倍体和四倍体量之间。 DNA荧光染料能与DNA结合，DNA含量的多少与荧光染料的结合量成正比，荧光强度反应了DNA吸收荧光分子的多少。通过流式检测就能反映细胞内DNA的含量，区分细胞周期的G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例。;;样品制备;DNA 流式检测的主要指标;Annexin V Assay （建议用于悬浮细胞）;在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜内侧，一旦发生细胞凋亡，可以从细胞膜的内侧迅速翻转到细胞膜外侧，使得PS 暴露在细胞膜表面。 在Ca2+存在时，Annexin V 与PS 有很高的亲和力，可与之迅速结合。PS 外翻发生在细胞核破裂、DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。 PI 被用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。坏死细胞可以同时与annexin V-FITC 和PI 结合显色，而PI 则被排除在活细胞(FITC 阴性)和早期凋亡细胞(FITC 阳性)之外。 ;Annexin V-FITC/ PI双染色法;PI常用于鉴别死细胞。凋亡细胞的细胞膜仍然是完整的，所以PI不能进入早期凋亡细胞核内。;