对人TRF2基因有效siRNA序列的筛选的论文.docVIP

　　对人TRF2基因有效siRNA序列的筛选的论文 【摘要】 目的 设计合成干扰端粒重复序列结合因子2(telomeric repeatbinding factor 2, trf2)基因表达的不同小型干扰rna(sirna)，筛选出能高效抑制trf2 基因表达的sirna。方法 根据人trf2 mrna的序列，设计合成3对不同的针对trf2的sirna、应用脂质体lipofectamim2000转染试剂将三对sirna转染人乳腺癌mcf7细胞，实时荧光定量rt－pcr技术检测trf2 mrna表达水平、ediated trf2 chen shaokun, liu lan,shui qinlin, zeng yongqiu,zhao jiao medical geics department of luzhou medical college，luzhou 646000，china corresponding author: shui qinlin, email: shuiql889@163.abstract：objective to design and synthesize small interfering rna（sirna）targeting different regions of telomeric repeatbinding factor 2(trf2) mrna，and select the sirna that can specifically and effectively suppresses trf2 expression. methods three trf2specific double stranded sirnas cf7 cells by lipofectamim2000，the transcription level of trf2 e fluorescence quantitative rtpcr and trf2 protein ized trf2sirnas could effectively inhibit the expression of trf2.conclusion trf2sirnas can be successfully designed and synthesized，or by rna interfere（rnai）. key or；gene therapy 端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的一种特化的dna－蛋白复合体。.端粒重复序列结合因子2(telomeric repeatbinding factor 2, trf2)是一个端粒特异性结合蛋白。trf2不仅在维持端粒动态平衡、保护染色体结构稳定中起关键作用[1]，还和细胞周期调控、dna损伤修复密切相关[2]。近年来的研究还发现很多肿瘤细胞中trf2的高表达可能与肿瘤发生、细胞凋亡相关[3]，故trf2成为目前肿瘤基因治疗研究新的靶点。 rna干扰(rna interference，rnai)是目前简单而高效地阻断哺乳动物细胞内特异基因表达的最有效方法之一，可达到基因敲除效果，且安全性好。但对于rnai来说，并不是所有针对靶基因mrna序列随机设计的sirna都能引起有效的基因沉默，干扰靶序列的选择对干扰效率的影响是至关重要的。因此，对能有效抑制特异基因表达的sirna的筛选是应用rnai技术进行基因功能、基因治疗等相关研究的重要基础。 本研究采用ambion公司的网上设计软件设计三对针对trf2的sirna、经化学合成法合成、应用脂质体lipofectamim2000转染试??将三对sirna转染人乳腺癌mcf7细胞、实时荧光定量rtpcr技术检测trf2 mrna表达水平、cf7细胞株购自四川大学华西医院移植免疫实验室。脂质体lipofectamim2000、trizol reagent rna提取试剂盒购自invitrogen公司； quant sybr green rtpcr kit 购自takara公司。 1.2 靶向trf2 的sirna设计、合成 根据genbank中报道的人类trf2基因核苷酸序列（nm_005652，gi:，采用ambion公司的网上设计软件（）设计3对针对人trf2基因不同位点的sirna靶序列，另设计一对不针对任何基因的阴性对照序列（negativecontrol sirna）。四段序列经blast（.ncbi.nlm. nih.gov/blast/）检索证实与其他基因无同源性，送上海吉玛制药技术有限公司化学合成，同时另合成一对fam标记阴性对照sirna。各sirna序列详见表1。 1.3