以变色酸2R为底物测定辣根过氧化物酶的研究.pdfVIP

第 32 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究报告 第 5 期 2004 年 5 月 Chinese JOurnaI Of AnaIyticaI Chemistry 593 ~ 597 以变色酸 ! 为底物测定辣根过氧化物酶的研究 焦 奎＊ 徐 静 孙 伟 江 宏 （青岛科技大学化学与分子工程学院，青岛 266042） 摘 要 变色酸 2R（CT2R）是一种具有电化学活性的物质，在碱性条件下，该物质在滴汞电极上 - 660 mV （ ）左右产生还原波，加入 和辣根过氧化物酶（ ）后，该物质被氧化生成具有非电化学活性的 !. SCE H2 02 HRP 物质，导致溶液中游离的 CT2R 浓度降低，相应还原波波高降低，HRP 在一定含量范围内与伏安峰的降低值具 有良好的线性关系。通过测定波高的降低值可测定 HRP，测定游离 HRP 的线性范围是 4. 0 X 10 - 5 ~ 4. 0 X - 3 。对酶促反应的动力学进行了研究，反应的米氏常数 ，最大反应速率 10 g / L #m = 1. 38 mmOI / L $max = 53. 9 nA / min。 关键词 变色酸 2R，辣根过氧化物酶，酶联免疫分析，伏安法 #$ 引$ $ 言 本课题组曾报道了一系列联苯胺及其衍生物［1 ~ 3］、苯二胺及其衍生物［4，5］和氨基酚类［6，7］物质为底 物的伏安酶联免疫分析法。辣根过氧化物酶［8，9］对 氧化这些有机化合物的反应有很强的催化作 H2 02 用。酶促反应的产物分别为偶氮联苯化合物、吩嗪类或亚胺类化合物、酮或含羰基的化合物。这些产物 均可在汞电极上还原产生良好的伏安峰，测定酶促反应产物的伏安峰便可测定 HRP 的活性，从而建立 起以 为标记酶的伏安酶联免疫分析法。这些体系的基本原理大都是在未加入 和 时，在 HRP HRP H2 02 底物有机化合物的伏安曲线上没有伏安峰或只有很小的空白伏安峰，加入 和 后，产生良好的 HRP H2 02 伏安还原峰，HRP 在一定含量范围内与伏安峰高具有良好的线性关系。本实验提出以 CT2R 为底物的 伏安酶联免疫分析新体系。本体系则是在未加入 和 时， 具有一良好的伏安还原峰，加 HRP H2 02 CT2R 入 和 后，伏安还原峰减小， 在一定含量范围内与伏安峰的降低具有良好的线性关系。 HRP H2 02 HRP 以 CT2R 为底物，测定游离