蛋白质的分析纯化选编.pptx

;第五组成员;第五组成员;;蛋白质的特点;蛋白质的来源;蛋白质的分离纯化;;常用的蛋白质分离纯化技术;常用的蛋白质分离纯化方法及原理;利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。;;;;当不同分子大小的蛋白质混合物流进凝胶层析柱时，比凝胶网孔大的分子不能进入珠内网状结构，排阻在凝胶珠以外，在凝胶珠缝隙间隙中向下移动。而比孔小的分子不同程度地进入凝胶珠内，这样由于不同大小分子所经历的路径不同而到分离。;常用的蛋白质分离纯化技术;等电点沉淀;常用的蛋白质分离纯化技术;;常用的蛋白质分离纯化技术;;亲和层析是一种吸附层析，抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原(或抗体)固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体(或抗原)选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。;;;常用的蛋白质分离纯化技术;类别;类别;原材料;;;一、样品的前处理重要性;二、样品前处理的原则; 含量高 来源丰富 成本低廉 分离制备工艺简便 生物材料 ;四、原材料的破碎;原材料的破碎方法;;;五、样品的提取;样品提取的注意事项;六、样品处理的过程;;;低分辨率操作单元;盐析法;水化膜;盐的加入方式;盐析注意事项;有机溶剂沉淀法（必须在低温下进行）;有机溶液沉淀法的影响因素;有机溶液沉淀法的影响因素;选择性沉淀;; ;蛋白质色谱技术; ;高效液相色谱仪的原理;什么是离子交换色谱？;电荷量的影响因素;离子交换填料的组成; 定义：固体支持物，赋予填料形状，一般为球形。选择条件： 1.尽可能小的非特异性吸附； 2.表面高度亲水； 3.具有相当量的化学基团可供活化； 4.具有较好的物理化学稳定性； 5.具有良好机械强度的多孔网状结构。 分类：树脂、纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺等;电荷基团;离子交换填料相关指标;缓冲液的选择;缓冲液的选择;离子交换过程;离子交换色谱操作流程;;洗脱;色谱柱的选择;小结;姓名：何容秀 学号： 2014150026 班级：2014级医检1班;原理;亲和色谱填料;基质的定义;基质;;配体的选择;配体的固相化;活化;;;接臂;间隔分子;;亲和色谱操作技术;;基本特点;;目的要求：;1、凝胶色谱法分离原理：;2、凝胶色谱填料分类;凝胶色谱填料分类;凝胶色谱条件：;3、注意事项：;4、凝胶色谱的应用;疏水作用色谱 反相色谱 集色谱;第一节 蛋白质分离与纯化 五、蛋白质的分析鉴定;蛋白质工程的意义;浓度测定方法;考马斯亮蓝法;;二喹啉甲酸法;;THANKS