真核表达survivin基因对曲古菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响的论文.docVIP

　　真核表达survivin基因对曲古菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响的论文 　　【摘要】 目的 探讨survivin基因对曲古菌素a(tsa)诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。方法 (1)将本实验室已构建成功的survivin正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)，经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞a2780，以转染pcdna3.1空载体的a2780细胞为对照。(2)rtpcr和rna和蛋白质的表达。(3)mtt比色法和流式细胞仪(facs)分别检测tsa对两组细胞存活率和凋亡率的影响。(4)rna和蛋白质表达明显高于空载体组。(2)mtt比色法和facs检测提示转染pcdna3.1survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组，差异有统计学意义(plt;0.05)。pcdna3.1survivin转染后的a2780细胞对tsa的敏感性明显降低。(3)a xiaoli，xing hui，a ding 　　department of obstetrics and gynecology, tongji hospital, tongji medical college, huazhong university of science and technology, a ding，email：dma@.abstract：objective to investigate the effect of survivin expression on apoptosis of ovarian cancer cells induced by trichostatin a(tsa). methods (1)a2780 cells rna and protein tt assay and floetry (facs). (4)expression of survivin protein ent by rna and protein in transfected cells transfected tt assay and facs, respectively(plt;0.05). the sensitivity of a2780 cells transfected e. conclusion apoptosis of ovarian cancer cells induced by tsa may be related to the expression of survivin gene. 　　key s;trichostatin a;apoptosis 　　卵巢癌在女性生殖器肿瘤中预后最差,极易转移和复发,这与卵巢癌化疗耐药密切相关。.cOmsurvivin基因是一种细胞凋亡抑制基因,位于17q25,是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins，iaps)中的一员[1]。它表达于胚胎和胎儿组织及绝大多数肿瘤组织，但在成人终末分化组织(胸腺、生殖器除外)无表达[2] 。它参与了恶性肿瘤的发生、发展和凋亡抵抗,使其成为值得关注的抗癌治疗靶基因。曲古菌素a( trichostatin a, tsa)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,通过改变瘤细胞染色体上组蛋白去乙酰化水平,影响多种基因的表达水平,从而诱导细胞周期阻滞和凋亡[3]。本实验将survivin的正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)转染人卵巢癌细胞a2780，探讨survivin基因对曲古菌素a(tsa)诱导卵巢癌细胞凋??作用的影响。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 材料和试剂 人卵巢癌细胞株a2780由武汉大学中国典型物种保藏中心提供;小牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品;trizol试剂和培养基rpmi1640购自美国gbico brl公司;曲古菌素a购自sigma公司;survivin兔抗人单克隆抗体购自santa cruz公司;四甲基偶氮唑盐(mtt, 5mg/ml, pbs配制)购自amresco公司;脂质体lipofectamim2000购自invitrogen tm公司;survivin正义全长真核表达质粒(pcdna3.1survivin)为本实验室保存[4];pcr引物由上海博亚生物技术有限公司合成。 　　1.1.2 主要仪器 酶标仪为美国biorad2550型;流式细胞仪(facscan becton dickinson)为美国公司产品;etra,german)为德国公司产品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 人卵巢癌细胞株a2780培养于含10%新鲜小牛血清的rpmi 1640培养基中,置于37℃, 5%co2, 相对湿度