胃宁颗粒治疗胃癌前病变实验研究的论文.docVIP

　　胃宁颗粒治疗胃癌前病变实验研究的论文 【摘要】 目的 探讨胃宁颗粒对胃癌前病变的治疗作用及可能机制。方法 60只大鼠随机分成空白组、模型组、维甲酸组、胃宁颗粒低剂量组、胃宁颗粒中剂量组、胃宁颗粒高剂量组。观察治疗前后各组大鼠一般情况、胃黏膜病理组织学、端粒酶活性、细胞增殖指数（pi）、细胞凋亡指数（ai）的变化。结果 胃宁颗粒各剂量组活动、饮食等一般情况好转，肠化生（im）、不典型增生（atp）、端粒酶阳性发生例数显著低于模型组（plt;0.05或plt;0.01）；胃宁颗粒各剂量组细胞增殖指数（pi）与模型组相比显著降低（plt;0.01），凋亡指数（ai）显著增高（plt;0.05）。结论 胃宁颗粒对胃癌前病变具有治疗作用，其机制可能与抑制端粒酶活性、促进癌前病变细胞凋亡抑制其增殖有关。 【关键词】 胃癌 癌前病变 胃宁颗粒 胃癌在全世界范围内占各类恶性肿瘤死因第2位,在中国也居第2位且未见明显下降趋势[1]。大量研究表明，胃癌的发生是一个漫长的演进过程。正常胃黏膜→浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠化生→异型增生→胃癌（肠型）的发病模式已经被普遍接受。在胃黏膜癌变发生发展过程中进行干预，可有效地降低胃癌的发生率。 1 材料与方法 1.1 实验动物 健康雄性nng)：德国fluka产品。 1.4 分组方法 60只l mnng液（饮水瓶用油漆涂黑避光），进食含0.03％雷尼替丁的纯鼠颗粒饲料，上午用56℃ 15％盐水按10ml/kg灌胃，禁食，当天下午用40％酒精按10ml/kg灌胃。每周用钳子夹住大鼠尾部一次，使之保持激怒、争斗状态，持续30 min，上述方法连续造模24周。 1.6 给药方法 胃宁颗粒高、中、低剂量组，分别为等效剂量的 4∶2∶1 倍（按大鼠与人的体表面积比计算）。等效剂量计算公式：大鼠等效剂量=人日用量×0.018×5。配成水溶液，高剂量组生药含量2.088g/ml，中剂量组生药含量1.044g/ml，低剂量组生药含量0.522g/ml。维甲酸组：大鼠剂量按等效剂量的2 倍量计算，配成水溶液，生药含量0.0762g/ml。空白组和模型组：用0.9%生理盐水。各组均按10ml/kg 体重的体积灌胃。10周为1疗程，共治疗1个疗程。用药24 h后处死大鼠，检测相关指标。 1.7 检测指标 1.7.1 一般情况 观察各组大鼠饮食、精神状态、形体、活动情况、被毛光泽度、大便及存活情况。 1.7.2 胃黏膜的大体病理改变 将胃沿大弯侧打开，肉眼观察胃黏膜的色泽、皱襞的改变，胃壁厚薄、胃黏膜表面增生结节、糜烂和溃疡等情况。 1.7.3 胃黏膜病理组织学改变 观察各组胃黏膜病理组织学改变，计数各组浅表性胃炎（csg）、萎缩性胃炎（cag）、肠化生（im）、不典型增生（atp）发生例数。 1.7.4 端粒酶活性的测定 采用单管法一步完成端粒重复序列扩增过程。胃黏膜组织，离心、洗涤后加入50μl的裂解液，经冰浴、离心后取上清2μl加入到trap反应中，另加45μl反应混合物，液体石腊封口，置25℃水浴30min后，94℃ 5min灭活端粒酶，然后行pcr循环，pcr循环结束后，进行杂交反应，洗板，二次杂交反应，洗板，加入显色液显色，最后置于酶标仪判定结果，波长450nm读取od值，标本od值大于阴性对照od值的2.1倍时，判为端粒酶活性阳性。 1.7.5 细胞增殖指数（pi）的测定 采用pa法。步骤按照试剂盒要求，计数5个视野的凋亡细胞数与癌细胞总数，取其平均值，计算pi。pi＝pa阳性细胞数/细胞总数×100％。 1.7.6 细胞凋亡指数（ai）的测定 采用tdt介导的dna末端原位标记染色法检测细胞凋亡。步骤按照试剂盒要求，计数5个视野的凋亡细胞数与癌细胞总数，取其平均值，计算ai。ai=tunel阳性细胞数/细胞总数×100％。 1.8 统计学方法 所有数据采用spss13.0进行统计分析，计数资料采用χ2检验，计量资料组间比较采用方差分析。 2 结果 2.1 各组大鼠一般情况的变化 正常组始终形肥体胖，食量较多，活动灵敏，被毛光泽；模型组形体消瘦，活动减少，被毛无光泽，食量少，大便稀溏；胃宁颗粒低、中、高剂量治疗组上述表现均不同程度好转，食量和活动增加，体重上升，大便转为正常；维甲酸组大鼠食欲有所增加，但被毛欠光泽，体重有所上升，大便成形。 2.2 各组大鼠胃黏膜的大体病理改变 正常组胃粘膜呈粉红色，有光泽，被覆较多黏液，黏膜皱襞表面光滑，走向规则，胃壁弹性良好，未见增生结节。造模组24周时，大鼠胃壁弹力减弱，黏膜层变薄，色苍白或紫暗，皱璧变平或走向紊乱，有的黏膜表面黄染，胃窦部可见一至数个灰白色结节，有的形成息肉状或菜花状隆起，质地偏硬，大部分大鼠胃黏膜糜烂