制片、染色和显微观察.pptVIP

食品微生物检验规范操作基础培训5 制片、染色及显微观察福建出入境检验检疫局技术中心食品所微生物实验室2010.05;主要内容：;5.1　显微操作;;显微镜的使用方法 ;低倍镜操作方法;高倍镜操作方法;油镜操作方法;油镜用后的处理： 第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的油； 第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残留的油迹； 第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。;普通显微镜的保养 ;§5.2 制片和染色 ;细菌的形态;染色方法;(二)复染色法 　 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。 　革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类： 　染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示； 　染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G―表示。 　 细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。;实验材料;实验内容与步骤;3．固定 手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次，共约2~3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后，进行染色。 4．染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5．水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6．干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 7．镜检; (二)细菌的革兰氏染色步骤 涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察 1．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。 2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4．斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。 ;革兰氏染色图解 ;步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上 ;;步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上 ;步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层 ;步骤4：风干 ;步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定 ;步骤6：结晶紫染色1分钟 ;步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片 ;步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗 ;步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗 ;步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗 ;大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 ;金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色 ;注意事项;;鞭毛;荚膜;芽孢;菌毛;Thank