葛根中葛根素的成份的分析的论文.docVIP

　　葛根中葛根素的成份的分析的论文 摘要:目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用rp-hplc法,以甲醇-水(32∶68)为流动相,检测波长为250 nm测葛根素含量;紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高,峰形改善;葛根素0.204~2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),回收率为98.7%(n=5),精密度rsd=0.86%。总黄酮浓度在4.08~16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好(r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。 关键词:葛根 葛根素 含量 分析 0 引言 葛根为豆科植物柴葛和甘葛藤的干燥根,前者习称柴葛,甘葛藤习称“粉葛”,始载于《神农本草经》,味甘、辛,性平,具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症,也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明,葛根含葛根异黄酮,主要为葛根素、大豆苷、大豆苷元3种活性成分,其中葛根素是本属的特征成分,也是主要成分,为了对葛根进行有效的质量控制,本实验以葛根素为指标,以柴葛、粉葛药材为对象,建立了高效液相色谱法测定其葛根素的含量方法,并采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定,为柴葛、粉葛的药材鉴定提供参考方法。.cOm 1 仪器与材料 1.1 仪器美国 illenium数据处理系统;m×250mm, 5μm);流动相∶甲醇-水(32∶68);流速1ml/min;检测波长250 nm;柱温22℃;进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下,样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离,保留时间在14.3 min左右。 2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。分别移取0.5,1.0,2.0,2.5ml于5ml量瓶,水定容,与原液共同作为hplc用对照品溶液。 2.1.3 供试品溶液的制备 热回流提取法:精密称取柴葛、粉葛粉末(过50目筛)各0.1g,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50 ml,称重。回流提取30min,放冷,称重并以30%乙醇补足减失重量,摇匀过滤,取续滤液为供试品,待测。 索氏提取法:称取柴葛、粉葛粉末各0.5g, 精密称定,以甲醇为提取剂提取4h,过滤,浓缩提取液并用甲醇定容于10ml量瓶。超声处理30min,取上清液以水定容于10ml量瓶,待测。 2.1.4 线性关系考察取对照品溶液,按照色谱条件进样10μl,葛根素进样量x(μg)为横坐标,以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为:y=3.5076×106x+3.2745×104,r=0.9999。结果表明,葛根素进样量在0.204~2.04μg范围内与峰面积线性关系良好,可用外标两点法计算含量。 2.1.5 精密度考察在色谱条件下,吸取同一对照品溶液10 μl,连续进样5次,测得峰面积,rsd=0.8%,表明进样与峰面积积分的精密度良好。 2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份,按外标法计算含量,rsd=2.8%,表明分析方法重复性良好。 2.1.7 稳定性考察精密吸取对照品溶液10μl,分别在0,1,2,4,8,12,24,48h时进样,在色谱条件下测定峰面积,其rsd值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定,因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。 2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份,20mg/份,精密称定后,每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5~3.3 ml,按“供试品溶液制备”项下操作,精密吸取10 μl,进样,计算回收率。 2.1.9 样品测定按“供试品溶液制备”项下操作,制备各样品溶液,精密吸取10μl,进样,在所选色谱条件下测定,外标两点法计算含量。 2.2 紫外分光光度法测定葛根中总黄酮含量 2.2.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8ml置于10ml量瓶,水定容,为紫外测总黄酮用对照品溶液。 以溶液浓度为横坐标,吸收度为纵坐标,得线性方程:y= 0.078x+0.0152,r=0.9998。表明总黄酮浓度在4.08~16.32μg/ml范围时与吸收度线性关系良好。 2.2.2 供试品制备 方法1:分别称取柴葛、粉葛4.5g,置于圆底烧瓶,乙醇回流提取3次,40ml/次,时间均为1h。合并3次滤液并浓缩置25ml量瓶,乙醇定容。取1ml用乙醇定容于100量瓶,再取1ml上清液