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中华人民共和国烟草行业标准 YC/T  FORMTEXT
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XXXX 烟草及烟草制品 植物甾醇的测定 高效液相色谱－串联质谱法 Tobacco and tobacco products——Determination of phytosterols ——HPLC-MS/MS method （在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上） (征求意见稿)  FORMTEXT
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XX发布  FORMTEXT
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XX实施 国 家 烟 草 专 卖 局 发 布 ICS.65.160 X85 备案号： YC YC/T ××××—×××× PAGE I 前??言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(SAC/TC/144/SC1)归口。 本标准起草单位: 云南烟草科学研究院。 本标准主要起草人：杨光宇、段沅杏、刘巍、王岚、张承明、陈永宽、缪明明。 YC/T XXXXX—XXXX  PAGE \* MERGEFORMAT 7 烟草及烟草制品 植物甾醇的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了烟草及烟草制品中5种植物甾醇(胡萝卜甙、麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇)的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于烟草及烟草制品中5种植物甾醇(胡萝卜甙、麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇)的测定。 本方法测定烟草及烟草制品中5种植物甾醇，即胡萝卜甙、麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的检出限分别为3.26 μg/g、2.79 μg/g、2.90 μg/g、2.35 μg/g和2.24 μg/g，定量限分别为10.86 μg/g、9.29 μg/g、9.65 μg/g、7.82 μg/g和7.46 μg/g。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法 原理 用甲醇萃取样品，移取萃取液经微孔滤膜过滤后，采用内标法使用高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS)对烟草及烟草制品中的植物甾醇进行定量分析。 试剂和材料 除特别要求以外，均应使用色谱纯试剂。水应符合GB/T 6682 中一级水的规定。 4.1 二氯甲烷，色谱纯。 4.2 甲醇，色谱纯。 4.3 麦角甾醇（ergosterol），纯度≥99%。 4.4 胆甾醇（cholesterol），纯度≥95%。 4.5 豆甾醇（stigmasterol），纯度≥95%。 4.6 β－谷甾醇（β-sitosterol），纯度≥98%。 4.7 胡萝卜甙（beta-Sitosterol-3-O-glucoside），纯度≥92.9%。 4.8 6-酮胆甾烷醇（6-Ketocholestanol），纯度≥98%。 4.9 内标溶液 4.9.1 内标储备液 称取5.0 mg的6-酮胆甾烷醇(4.8)置于10 mL容量瓶中，加入少量二氯甲烷(4.1)溶解，甲醇(4.2)稀释至刻度，配制成浓度均为0.5 mg/mL的标准储备液。该标准储备液在2～8 ℃下保存可储存3个月。 4.9.2 一级内标溶液 移取1mL 6-酮胆甾烷醇 内标储备液（4.9.1）至25 mL容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释至刻度，配制成浓度为20.0 μg/mL 的一级内标溶液。该溶液置于2～8℃条件下保存，有效期为3个月。 4.10 萃取溶液 移取8 mL一级内标溶液（4.9.2）置于1000 mL的容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释至刻度。 4.11 标准溶液 4.11.1标准储备溶液 分别称取约5 mg麦角甾醇（4.3）、胆甾醇（4.4）、豆甾醇（4.5）、β－谷甾醇（4.6）、胡萝卜甙（4.7）置于10 mL容量瓶中，加入少量二氯甲烷(4.1)溶解，甲醇(4.2)稀释至刻度，配制成浓度均为0.5 mg/mL的标准储备液。该标准储备液在2～8 ℃下保存可储存3个月。 4.11.2 一级混合标准溶液 分别准确移取麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇、β－谷甾醇、胡萝卜甙（4.11.1）标准储备液0.5、1.0、1.0、1.0 、1.0 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释至刻度，配制成麦角甾醇、胡萝卜甙、胆甾醇、豆甾醇和β－谷甾醇浓度分别为10