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- | 2010-03-26 颁布
- | 2010-06-01 实施
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GB 4789.30-2010食品安全国家标准 食品微生物学 14).pdf
中华人民共和国国家标准
GB 4789.30—2010
食品安全国家标准
食品微生物学检验
单核细胞增生李斯特氏菌检验
National food safety standard
Food microbiological examination: Listeria monocytogenes
中华人民共和国卫生部 发布
2010-03-26 发布 2010-06-01 实施
GB 4789.30—2010
I
前 言
本标准代替 GB/T 4789.30-2008《食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》。
本标准与 GB/T 4789.30-2008 相比,主要变化如下:
——修改了标准的中英文名称;
——删除“第二法 全自动酶链荧光免疫分析仪筛选法”;
——删除“第三法 全自动病原菌检测系统筛选法”。
本标准的附录 A 为规范性附录。
本标准所代替标准的历年版本发布情况为:
——GB 4789.30-1994、GB/T 4789.30-2003、GB/T 4789.30-2008。
GB 4789.30—2010
1
食品安全国家标准
食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验
1 范围
本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的检验方法。
本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。
2 设备和材料
除微生物实验室常规无菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1 冰箱:2 ℃~5 ℃。
2.2 恒温培养箱:30 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃。
2.3 均质器。
2.4 显微镜:10×~100×。
2.5 电子天平:感量 0.1 g 。
2.6 锥形瓶:100 mL、500 mL。
2.7 无菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)。
2.8 无菌平皿:直径 90 mm。
2.9 无菌试管:16 mm×160 mm.。
2.10 离心管:30 mm×100 mm。
2.11 无菌注射器:1 mL。
2.12 金黄色葡萄球菌(ATCC25923)。
2.13 马红球菌(Rhodococcus equi)。
2.14 小白鼠:16 g~18 g。
2.15 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂
3.1 含 0.6 %酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):见附录 A 中 A.1。
3.2 含 0.6 %酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):见附录 A 中 A.2。
3.3 李氏增菌肉汤 LB(LB1,LB2):见附录 A 中 A.3。
GB 4789.30—2010
2
3.4 1 %盐酸吖啶黄(acriflavine HCl)溶液:见附录 A 中 A.3.2.1。
3.5 1 %萘啶酮酸钠盐(naladixic acid)溶液:见附录 A 中 A.3.2.1。
3.6 PALCAM 琼脂:见附录 A 中 A.4。
3.7 革兰氏染液:见附录 A 中 A.5。
3.8 SIM 动力培养基:见附录 A 中 A.6。
3.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和 V-P 试验用]:见附录 A 中 A.7。
3.10 5 %~8 %羊血琼脂:见附录 A 中 A.8。
3.11 糖发酵管:见附录 A 中 A.9。
3.12 过氧化氢酶试验:见附录 A 中 A.10。
3.13 李斯特氏菌显色培养基。
3.14 生化鉴定试剂盒。
GB 4789.30—2010
3
4. 检验程序
单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图 1。
图 1 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌
以无菌操作取样品 25 g(mL)加入到含有 225 mL LB1 增菌液的均质袋中,在拍击式均质器上连续
均质 1 min~2 min;或放入盛有 225 mL LB1 增菌液的均质杯中,8000 r/min~10000 r/min 均质 1 min~2
min。于 30 ℃±1 ℃培养 24 h,移取 0.1 mL,转种于 10 mL LB2 增菌液内,于 30 ℃±1 ℃培养 18 h~24 h。
5.2 分离
取 LB2 二次增菌液划线接种于 PALCAM 琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上,于 36 ℃±1 ℃培养
24 h~48 h,观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在 PALCAM 琼脂平板上为小的
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