持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定.pdfVIP

第 31 卷第 4 期 江西农业大学学报 Vol. 31 ,No. 4 2∞9 年 8 月 Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis Aug. ,2009 文章编号 :1ω-2286(2仰)但 -0717 -06 持续表达 HCV NS5B 的 Bel-7402 细胞系的构建与鉴定 孔令保，吴晓玉，李昆太，徐 波，刘好桔，熊舒瑭 (江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌 33∞45 ) 摘要 :HCV NS5 B 是 HCV 复制所必需的 RNA 依赖的 RNA 聚合酶和抗日CV 药物的一个理想靶标，构建持续表 达 NS5 B 的肝细胞系将有助于研究 HCV 在肝细胞的复制机制和抗 HCV 药物的研发。 al 酶切含有 NS5B 基 因的重组表达载体 pcDNA -5B ，获得的线性化 pcDNA -5B 通过脂质体转染人肝癌细胞系 Bel-7402 细胞， G4 18 筛选转染细胞。阳性细胞经基因组 PCR ， RT-PCR 和 Western Blot 鉴定，证实获得持续表达 NS5B 的 Bel -7拍2 细胞系。体外复制试验和荧光素酶试验表明 :Bel-7402 细胞表达的 N臼 B 蛋白有体外和细胞内 RNA 依赖的 RNA 聚合酶活性。持续表达有聚合酶活性的 HCV N臼 B 的 Bel-7402 细胞系的建立为进一步研究 NS5 B 催化的 HCV 复制机制和 N臼 B 抑制剂的筛选奠定基础。 关键词 :HCV; NS5 B; Bel-7402; 持续表达;活性 中图分类号 :Q785 ;R5 \2. 6 丁 文献标识码 :A EstabUshment of the Bel - 7402 Lines Constitutively Expressing EnzymaticaIly Active HCV NS5B KONG Ling - bao , WU Xiao - yu , U Kun - tai , XU Bo ,LIU Hao - ju ,XIONG Shu - jun (College of Life Science and Engineering, JAU , Nanchang 330045 , China) Abstract: HCV RNA - dependent RNA polymerase (NS5 B) is stricùy required for viral replication and represents an attractive t.arget for antiviral drug development. Establishment of hepatic celllines constitutively expressing enzymatically active HCV NS5 B should be helpful for studying the mechanisms of viral replication in hepatic cells and for the development of antiviral drugs. The recombinant vector pcDNA - 5B expressing w