NR2B在小鼠骨癌痛中的作用和机制研究[黄东].pptVIP

NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究 中南大学湘雅三医院 黄 东 教授 ; ※ 目前，全球癌症患者的数量呈;临床上，癌痛表现为进行性加重，常伴随有爆发痛； 癌痛与炎性痛和神经病理性痛存在着不同的外周和中枢机制[1] 。 如癌痛：胶质细胞增生肥大；GFAP ;★ NMDA受体活化是反复伤害性刺激诱发中枢敏化 的基础，是持续性疼痛产生和维持的关键 [2] 。 ★ 大量研究证实：NMDA受体的亚基NR2B在炎性痛、 神经病理痛中参与了伤害性信息传递，在疼痛调 制及痛觉敏化 的形成和维持中发挥重要作用 [3] 。;★ 研究显示，MAPK信号通路在神经可塑性和炎症 反应的细胞信号转导过程中起重要作用[4] 。 ★ 增生肥大的星形胶质细胞能释放大量胶质纤维酸 性蛋白（GFAP），骨癌痛的产生和维持与脊髓 星形胶质细胞结构和功能的变化密切相关[1] 。;研究癌痛的确切机制，需要适当的动物模型，现有动物模型仍显不足。;我们从如下四个方面加以研究： 1、建立一个小鼠骨癌痛新模型 2、NR2B在骨癌痛小鼠前扣带回和脊髓中的分 布与表达 3、脊髓NR2B基因沉默对小鼠骨癌痛的影响 4、MAPK信号通路介导的NR2B在小鼠骨癌痛中 的作用机制; 实施方案： ◆检测癌痛小鼠脊髓和前扣带回NR2B的表达和分布，分析小鼠NR2B的表达和小鼠疼痛行为学关系。 ◆应用RNA干扰技术，沉默骨癌痛小鼠NR2B基因；通过对比干扰组小鼠与癌痛组小鼠NR2B的表达以及两组小鼠疼痛行为学，从而阐明NR2B是否在癌痛的发生与维持中起重要作用。;◆对比骨癌痛小鼠NR2B基因沉默前后，MAPK 信号通路及其介导的下游信号分子表达的相应改变； ◆研究MAPK 信号通路中信号分子表达的相应改变与GFAP的关联性； ▲探索MAPK信号通路在小鼠骨癌痛中的可能作用机制。;选用清洁级雄性C57BL/6小鼠;选用清洁级雄性C57BL/6小鼠;选用清洁级雄性C57BL/6小鼠;选用清洁级雄性C57BL/6小鼠;结 果; 体重和一般状况 ;2.行为学测试 ; 3. 放射学检测;组织学观察 ;▽行为学、放射学、组织学三方面证实： C57BL/6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞，能成功制备小鼠骨癌痛模型，且此模型稳定、重复性好，与人类骨癌痛高度相似。;5、实时荧光定量PCR检测前扣带回和脊髓NR2B的表达;脊髓NR2B的表达;第14天前扣带回NR2B的表达 A癌痛组前扣带回100倍； B癌痛组前扣带回区域200倍 C正常组前扣带回100倍； D正常组前扣带回区域200倍 E假手术组前扣带回100倍；F假手术组前扣带回区域200倍; L4-L6脊髓NR2B的表达;L4-L6脊髓NR2B的分布;7、Western Blot检测L4-6段脊髓NR2B的表达; 1、癌痛组小鼠脊髓和前扣带回中NR2B表达均明显增加，脊髓各层表达量由大到小依次为前角、背角浅层、中央导水管周围；且癌痛组NR2B表达上调的同时，疼痛行为学也有相应的改变。初步表明脊髓和前扣带回中的NR2B表达增加与小鼠骨癌痛产生和维持存在一定相关性。 2、同一癌痛模型中观察到NR2B在脊髓和前扣带回同时高表达，提示在癌痛的产生和维持中不仅激活了脊髓低位中枢，而且有脑部中枢的参与。 3、本研究初次发现NR2B在脊髓前角细胞表达呈强阳性，为下一步研究提供了新的思路。;;9、Western Blot检测小鼠脊髓L4-6节段NR2B的表达;;10、实时荧光定量PCR检测小鼠脊髓NR2B、SP、 c-fos和GFAP基因的表达;11、实时荧光定量PCR检测小鼠脊髓NR2B、SP、 c-fos和GFAP基因的表达; 　　　　　　; Western Blot检测接种术后第14天 小鼠脊髓p-p38的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组;Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓NR2B的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组;Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓p-p38的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组;;解除Mg2+ 对NMDA受体离子通道的阻断作用;;