ABCA1基因多态性与血浆载脂蛋白A1水平的关系的论文.docVIP

　　ABCA1基因多态性与血浆载脂蛋白A1水平的关系的论文 作者：李亚，王玉明，王丹，贺勇 【摘要】 目的：探讨汉族人群腺苷三磷酸结合盒转运体a1（abca1）基因单核苷酸多态性（snp）与血浆载脂蛋白a1（apoa1）水平的关系. 方法 ：选取abca1基因r219k, v825i, m883i和r1587k等4个编码区snps，采用pcr限制性片断长度多态性 分析 技术确定376名健康个体基因型；用thesias程序分析snps的连锁不平衡关系及单倍型. 结果：受检人群中，4种snps各自不同基因型个体间apoa1水平差异均未见统计学意义（p＞0.05）. r219k与m883i, v825i与m883i以及v825i与r1587k两两间存在连锁不平衡(plt;0.01). 以v825i 和r1587k 构建的两位点单倍型中，ik单倍型携带者apoa1水平较vr单倍型携带者显著降低(plt;0.05). 结论：abca1基因v825i和r1587k多态性与汉族人群血浆apoa1水平变化有关，但这种关联取决于该两个snps间形成的单倍型. 【关键词】 abca1基因；载脂蛋白a1；单倍体型；连锁不平衡 0引言 血浆高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，hdlc）水平降低是冠心病的独立危险因素之一［1］. 腺苷三磷酸结合盒转运体a1（atpbinding cassette transporter a1，abca1）介导胆固醇、磷脂从肝外组织的流出，并通过与载脂蛋白a1（apolipoprotein a1，apoa1）相互作用，在胆固醇逆向转运和高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein，hdl）生成的起始阶段发挥着关键的作用，因此，abca1被认为是决定hdlc水平的主要因素之一［2］. 群体遗传学 研究 表明，abca1基因的某些单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，snp）可改变abca1蛋白活性并由此引起hdlc水平变化，从而 影响 个体对冠心病的易感性［3-4］. 然而，有关abca1基因snps对血浆apoa1水平影响的研究报道却相对缺乏.为此我们在本研究中探讨了abca1基因4种snps及其构成的单倍型与汉族人群apoa1水平变化的关系. 1对象和方法 1.1对象来自四川大学华西 医院 和成都医学院第一附属医院无血缘关系的四川地区汉族体检个体376（男194，女182）例，年龄(58.4±8.6)岁，apoa1水平（1.324±0.186） g/l，体质量指数（24.62±3.39） kg/m2，总吸烟率为27%，并经询问病史、体检、心电图等检查排除心血管疾病???. 1.2方法 1.2.1标本采集与处理禁食12 h后抽取研究对象外周血5 ml，采用免疫比浊法并按试剂盒（上海荣盛生物技术公司）推荐条件测定血浆apoa1水平；另采集外周血3 ml，1 ml acd抗凝，盐析法提取dna，te缓冲液溶解dna并置于4 ℃冰箱中备用. 1.2.2多态位点的基因型分型采用pcr限制性片断长度多态性分析法对4个snps进行分型. 首先，参照基因组序列（genbank登录号：nm005502）设计合成相应pcr引物，对受检者abca1基因r219k，v825i，m883i和r1587k等4个snps位点所包含的dna序列进行扩增；再取扩增产物15 μl，分别加入4 u限制性内切酶和2 μl 酶切缓冲液，并加超纯水至总体积20 μl，37℃水浴中保温16 h；最后，消化产物经30 g/l琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像系统分析电泳结果，判定个体基因型. pcr反应条件、限制性内切酶以及各基因型酶切情况见表1.表1abca1基因snps的基因型分型 统计学处理：每个snp的hardy883i和r1587k多态各自不同基因型个体间apoa1水平差异均无统计学意义（p＞0.05, 表3）. 表34种多态位点不同基因型个体间apoa1水平比较 2.3配对连锁不平衡分析abca1基因4个snps位点的配对连锁不平衡用统计量d′表示（d′=d/dmax）. 表4可见，在全部6个配对组合中，v825i分别与m883i和r1587k间存在较强的连锁不平衡（d′gt;0.7）. 此外，在r219k和m883i间也检测到有统计学意义的连锁不平衡（d′=0.572）. 值得注意的是，在r219k至r1587k位点约1.36 kb范围内，我们未发现2个以上的snps位点彼此间的连锁不平衡关系. 2.4abca1基因单倍型与apoa1水平的关联 分析 由