Ad5F35LMP2重组腺病毒的构建的论文.docVIP

　　Ad5F35LMP2重组腺病毒的构建的论文 【摘要】 目的：构建ad5f35lmp2重组腺病毒。方法：分别以ecor ⅰ单酶切pshlmp2和pdc316，将lmp2目的基因片段和线性化的pdc3l6连接，克隆构建pdc3l6lmp2，以pcr和酶切的方法鉴定插入方向正确。pdc3l6lmp2与腺病毒骨架pbhgfiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒ad5f35lmp2，pcr及间接免疫荧光进行鉴定。结果：经pcr和酶切鉴定证实pdc3l6lmp2构建成功。pdc3l6lmp2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑，说明二者在293细胞中同源重组并包装成功。经pcr证实重组腺病毒ad5f35lmp2构建完成，间接免疫荧光鉴定lmp2蛋白能在细胞膜上有效表达。结论：本实验成功构建了含eb病毒lmp2全序列的ad5f35lmp2重组腺病毒，为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用ad5f35lmp2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础。 【关键词】 鼻咽癌 重组腺病毒 基因免疫治疗 　　construction and identification of rebinant adenovirus ad5f35lmp2 containing lmp2 gene 　 　　mo edical university, nanning 530021，china 　　［abstract］ objective:to construct rebinant adenovirus expressing epsteinbarr virus(ebv)lmp2 in vector ad5f35.methods:restriction fragment of lmp2 from pshlmp2 ed by polymerase chain reaction(pcr) and restriction enzyme digestion. the constructed pdc316lmp2 p2, ed by pcr and indirect immunefluorescence test.results:the construction of pdc316lmp2 ed e digestion. second, the significant virus plaques p2 together eans the successful homologue rebination and virus packaging of the interest fragment in 293 cells. third, the successful construction of the rebinant adenovirus ad5f35lmp2 ed, and the efficient expression of lmp2 protein embrane munefluorescence test.conclusion:the rebinant adenovirus of ad5f35lmp2 p2 protein has been established that could be used in the gene therapy for nasopharyngeal carcinoma patients and to test the biosafety and biological function of ad5f35lmp2 in the future. 　　［key a；rebinant adenovirus；gene immunotherapy 　　鼻咽癌（npc）是中国南方常见的恶性肿瘤之一。.npc患者主要靠放射治疗。但放疗对机体的非特异性损伤较大，治疗后完全缓解的患者约有40%～50%出现远处转移和局部复发而导致治疗失败。因此在常规治疗的基础上迫切需要寻找新的综合治疗手段，提高患者细胞免疫功能将成为肿瘤综合治疗不可缺少的一部分。研究表明在npc组织有eb病毒lmp2蛋白持续表达，lmp2蛋白具有ctl特异靶抗原的抗原决定簇，能促发特异性细胞免疫。dc是扩增特异性抗肿瘤ctl最好的抗原递呈细胞，目前重组腺病毒是将外源基因导入dc等细胞内常用的载体之一，本研究构建了含eb病毒lmp2全序列的ad5f35lmp2重组腺病毒，并对其在细胞内的表达进行了研究，为下一步进行该重组腺病毒的生物学功能研究及今后临床基因治疗应用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 pshlmp2质粒含lmp2全cdna序列，由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制