DCSIGNR在人胎盘滋养层细胞中的表达的论文.docVIP

　　DCSIGNR在人胎盘滋养层细胞中的表达的论文 【摘要】 　　目的: 探讨dcsignr在人胎盘绒毛组织中的定位及在体外培养滋养层细胞上的表达。方法: 建立稳定的滋养层细胞原代培养体系, 采用免疫组化单染及荧光双染的方法检测不同孕期正常胎盘绒毛组织及体外培养滋养层细胞上dcsignr的表达。结果: dcsignr主要表达于胎盘滋养层细胞、 hofbauer细胞及胎盘微血管内皮细胞的胞质及包膜, 在原代培养的人绒毛膜滋养层细胞中的dcsignr的表达与在体组织表达一致。结论: dcsignr表达于不同孕期的胎盘组织及体外分离培养滋养层细胞, 为研究滋养层细胞上该受体在宫内感染中的作用提供体外实验的细胞学基础。 【关键词】 滋养层细胞 dc singr 免疫组织化学 宫内感染 　　expersstion of dcsignr in the primary trophoblast cells and its significanc 　　zhang qin, li junnan, linag zhiqing 　　department of obesterics and gynecology, southilitary medical university, chongqin 400038, china 　　[abstract] aim: to study the expression of dcsignr in human placenta and trophoblast cells cultured in vitro, and provided a basis for experiment in vitro aiming to investigate the mechanism of receptormediated intrauterine transmission. methods: primary culture system of human chorionic trophoblast cells ined by immunohistochemistry(ihc) stain. results: dcsignr ainly expressed in the membrane and plasm in placental trophoblast cells, hofbauer cells and placental vascular endothelial cells. conclusion: the expression of dcsignr in human placenta and trophoblast cells cultured in vitro is determined by ihc; the study provides a cellular basis for experiment in vitro aiming to investigate the mechanism of receptormediated intrauterine transmission. 　　[key3), 立即用组织体积20倍的40 g/l多聚甲醛液固定, 石蜡包埋(温度低于60℃)、 连续切片(厚度6～7 μm), 用于免疫组化检测。 　　1.2 方法 　　1.2.1 滋养层细胞的分离及鉴定 采用胰蛋白酶/dnase序贯消化法行人绒毛膜滋养层细胞的分离; 用35%～45%的不连续percoll密度梯度离心方法纯化细胞; 抗细胞角蛋白7（ck7）抗体对分离纯化细胞进行鉴定[3]。 　　1.2.2 免疫组化单染、 荧光双染检测dcsignr (1)不同孕期胎盘绒毛组织dcsignr染色: 石蜡切片烤片(58～60)℃ 1 h; 经二甲苯、 梯度酒精脱蜡至水; 30 ml/l过氧化氢37℃处理切片20 min, 封闭内源性过氧化物酶; 蒸馏水冲洗, 0.01 mol/l pbs(ph7.2～7.4)漂洗3次, 每次5 min; 按照一抗要求对组织行预处理; 0.01 mol/l pbs(ph7.2～7.4)漂洗3次, 每次5 min; 正常山羊血清37℃孵育15 min, 倾去, 不洗; 滴加一抗(抗dcsignr抗体1∶400稀释), 湿盒内孵育, 4℃过夜; 0.01 mol/l pbs(ph7.2～7.4)漂洗3次, 每次5 min; 生物素化二抗37℃孵育15 min; 0.01 mol/l pbs(ph7.2～7.4)漂洗3次, 每次5 min; 辣根酶标记链霉卵白素37℃孵育15 min; 0.01 mol/l pbs(ph7.2～7.4)漂洗3次, 每次5 min; dab显色