深圳大学理科选修“遗传学发现》课件7重组DNA.pptVIP

重组DNA;大肠埃希菌;生物学性状 ;卫生细菌学检查 ;1、细菌培养--平板培养;限制性内切酶;沃纳?阿尔伯;限制—修饰现象;EOP:Efficiency of plating（生长在不同寄主中的λ噬菌体的成斑率，表示限制程度）;产生这种现象的原因何在;限制—修饰体系;在限制修饰系统中，限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA（如噬菌体DNA等），使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制； 而宿主细胞自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用：在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制修饰系统中修饰作用的含义。 限制—修饰体系，其功能就是保护自身的DNA，分解外来的DNA，以保护和维持自身遗传信息的稳定，这对细菌的生存和繁衍具有重要意义。 ;分类;命名法;基本特征;质粒;莱德伯格（1925~2008），美国遗传学家。细菌遗传学的创始人之一。1925年5月23日生于美国蒙特克莱市。1944年获哥伦比亚大学学士学位，以后曾在医学院学习，不久转入耶鲁大学，于1947年获博士学位。1959年起任斯坦福医学院教授兼遗传学系主任。1962年任肯尼迪分子医学实验室主任。 　　他在耶鲁大学期间，发现细菌的遗传重组。1946年，他和E.L.塔特姆发现遗传重组的普遍性。1952年发现细菌的F因子。1952年发现沙门氏菌中的普遍性转导，1953年发现大肠杆菌的温和噬菌体λ在染色体上占有一定位置。1956年发现λ噬菌体能进行局限性转导。他们的研究工作还包括应用细菌的有性生殖和转导进行细菌的免疫学和代谢作用等方面的研究。 　　1958年他和G.W.比德尔和E.L.塔特姆共同获得诺贝尔生理学或医学奖。 ;接合现象的发现;细菌的杂交实例（1946）;这种野生型细胞如何出现的？;试验证明： 接合过程是一种单向转移，A菌株遗传物质 ? B菌株，从供体到受体。;⑴ F 因子：致育因子或称性因子，是一种附加体。;F因子分为三个区域： 自主复制区：有转移的起点和2个复制起点。复制起点Ori T是在染色体转移时进行滚环复制时的复制起点；Ori V是在营养时期，即游离在细胞质中独立复制时的复制起点。 转移区：主要有合成性伞毛即F纤毛（F pili）的操纵子。F纤毛是由性 伞毛蛋白构成，呈管状，又叫接合管。通过接合管可将供体和受体细胞相联。共30kb长，有40个基因与DNA的转移有关。 重组区：有4个插入顺序（IS），通过和宿主染色体 上的IS同源重组或通过转座，F因子可以整合到宿主不同位点上。 ;⑶ F 因子的三种状态; F＋与F－菌 （1）有F因子的细菌称为F＋，细菌增殖时可把F 因子传递给后代细胞（通过自主复制）。 （2）没有F因子的细菌称为F－，F＋细菌经吖啶 橙处理而丢失，成为F－。F因子一经丢失， 细胞中便不再出现； （3）F＋可以和F－杂交，而不能和F＋杂交； （4）F＋菌与F－菌混合（即F＋×F－）1小时后，约95%的F－菌转变为F＋菌，而原来的F＋仍然保留有F因子。;(1) F纤毛合成：由性伞毛蛋白构成，接合管使供体和受体细胞接触。 (2) 转移启动：F因子从转移复制起点(Ori T)开始向F －转移（ 5’端首先进入受体）。 (3) 单链转移，滚环复制。;Hfr 是F因子整合到E.coli 染色体上的结果;分子克隆;pUC18;蓝白斑筛选重组子的原理：;利用菌落颜色筛选重组子;PUC质粒载体的优点：;意义与应用 ;《Frankenstein》（译作“科学怪人”或“弗兰肯斯坦”）是英国诗人雪莱的妻子玛丽·雪莱在1818年创作的小说，被认为是??界第一部真正意义上的科幻小说。“弗兰肯斯坦”是小说中那个疯狂科学家的名字，他用许多碎尸块拼接成一个“人”，并用电将其激活。《Frankenstein》已经成为科幻史上的经典，现在很多幻想类影视作品中经常出现这个怪物的翻版。