第4章色层分析法1.pptVIP

第三章 色层分析法;色层分析法提纲;●概述;茨维特的实验;色层分析法是由流动相，带着被分离的物质流经固定相，在移动过程中，各种溶质受到固定相不同程度的作用，从而使试样中的各种组分分离。;柱层析：固定相装填在管中成柱形，在柱中进行的层析分离； 纸层析：利用滤纸作为固定相的层析分离； 薄层层析：固定相在玻璃板、铝膜等支持物上铺成薄层的层析分离。;根据分离的原理分类;一．吸附层析（adsorption chromatography）; 吸附 指在固体或液体内部或表面的选择性传递。 被吸附的物质称为溶质，固体材料称为吸附剂。; 吸附层析 混合物随流动相通过由吸附剂组成的固定相时在固定相和流动相作用下发生吸附、脱附、再吸附、再脱附的反复过程。;1．原理; 吸附等温线：在一定温度下，某种组分在吸附剂表面达平衡状态时在两相中浓度的相对关系曲线。 吸附等温线的斜率KD表示分配系数，Cs表示溶质在固定相中的浓度，Cm表示溶质在流动相中的浓度达到平衡时在固定相中的浓度;线形的吸附等温线 非线形的吸附等温线;2．吸附剂的选择; 吸附剂的多孔结构，粒度和粒子形状是影响色层系统特性的基本因素。;几种常用的固体吸附剂 ; 活化 吸附剂一般可分为极性和非极性两类。 极性吸附剂包括氧化物、氢氧化物和盐，在吸附过程中，离子与偶极、偶极与偶极的相互作用起主导作用。 非极性吸附剂如活性碳，硅胶等，吸附作用主要是色散力作用的结果。 影响吸附剂性质因素：化学结构、吸附剂的溶剂化作用以及吸附剂的预处理、吸附剂的物理状态;在选择吸附剂时，一般是根据吸附剂和被吸附物质理化性质进行的。极性强的吸附剂易吸附极性强的物质、非极性的吸附剂易吸附非极性的物质。但是为了便于解吸附，分离弱极性的组分选用极性强的吸附剂，分离极性较强的组分应选用极性小的吸附剂。 ;（1）硅胶; 活化：在１０５～１１０℃加热３０min活化 不同形式（H/G/F） 粘合剂（煅石膏：牢度差，不能用于分离无机物；羧甲基纤维素：牢度好，不能用腐蚀性显色剂；淀粉：不能用于分离有机物） 　硅胶具有微酸性，可用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体激素、类脂，萜类及色素等物质，硅胶用量一般是样品量的 ３０～３６倍。 ;（2）氧化铝; ;（3）羟基磷灰石 ;在使用HA作为固定相基质时，有几点应注意：;iii)忌用柠檬酸缓冲液和PH5.5的缓冲液。当用过的HA层析柱再生时，要先挖去顶部的一层HA，然后用一倍床体积1mol/LNaCl溶液洗涤，接着用4倍床体积的平衡液洗涤平衡，如此处理后即可使用。 iv)就操作容量来说，一般细颗粒HA比粗的大；从分辨率比较，粗颗粒HA也没有细的好。但是用细的颗粒层析时，柱子直径大些才能达到满意的流速。 参考书：《生物化学技术原理及其应用》 P45～P46 ;（4）聚酰胺 ; 一般讲来 ，具有以下规律： ◆能形成氢键基团较多的溶质，其吸附能力较大； ◆对位、间位取代基团都能形成氢键时，吸附能力增大，邻位的使吸附能力减少； ◆芳香核具有较多共轭双键时，吸附能力增大； ◆能形成分子内氢键者，吸附能力减少。 ;（5）吸附树脂 ;;42;吸附树脂在中药提取分离中的发展和应用;吸附树脂吸附作用的影响因素;树脂的前处理;吸附树脂的安全性;用于中药成份的提取精制;Date;Date;新型吸附树脂的开发氢键型吸附树脂;Date;不同吸附树脂对GBE的分离效果;药材;离子-偶极型吸附树脂 ;不同树脂对穿心莲内酯的提取效果;用于色层分离的选择性吸附树脂;用于非水体系的吸附树脂;分子筛吸附树脂;展望;3．流动相及其选择 ; 流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分离的溶质分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。 强极性的组分容易被吸附剂所吸附，应选用极性较强的流动相才能把它从吸附剂上洗脱下来，使之沿着层析柱前进； 弱极性的组分则应选用弱极性的流动相洗脱之。 ; 以聚酰胺为吸附剂时,一般用水作流动相。 以吸附树脂为吸附剂时，由于分子间吸附力较弱，可用低级醇、酮或其水溶液洗脱。 原则： 弱酸性物质在酸性下吸附，碱性下洗脱；弱碱性物质在碱性下吸附，酸性下洗脱。 在高浓度盐溶液中进行吸附常用水解吸。 常用的流动相按其极性增强顺序排列为: 石油醚 环己烷 二硫化碳 四氯化碳 苯 甲苯氯仿乙醚乙酸乙脂丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶酸。 在实践中一般从极性小到极性大溶剂，通过实验来选择。 ;表1 各种溶剂的介电常数（ * 20℃ ，其他25 ℃） ; 在选择洗脱剂时,还可以由各种溶剂按不同配比配成混合溶剂作为流动相；因此流动相的种类很多，流动相的选择也就比固定相