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从香烟对乳酸菌的影响看吸烟对消化功能的危害 陈正怡 孙斐 陈子彧 辅导老师：孙艳芬 程虹 摘要：把不同浓度的香烟浸出液添加到乳酸菌培养基上，观察乳酸菌的生长繁殖情况。经过多次重复地实验，发现香烟对乳酸菌的生长有明显的抑制作用，浸出液浓度越大，抑制作用越明显。一支香烟在100ml水中的浸出原液与乳酸菌稀释液按1:1的比例混合，可使90%左右的乳酸菌无法生长。由于乳酸菌是能帮助消化的益生菌，对于维持消化道菌群平衡有着重要作用，本实验间接反映了吸烟对消化系统也有明显的危害。 关键词：香烟 乳酸菌 消化 一、问题的提出 香烟对于呼吸系统的危害已经人尽皆知，但除了呼吸系统外，香烟对身体的其它功能是不是也有明显的毒害作用呢？我想到了我的一个常年吸烟的亲戚，不仅因为吸烟把牙齿染黄了，而且吃得也不多。他喜欢饭后一支烟，经常说饿的时候抽支烟就觉得不觉得饿了，感觉很满足。那么，香烟是不是对我们的消化功能有抑制作用呢？如果有的话有没有方法可以很形象地把危害显示出来让人警醒？ 在学习测量乳酸菌的活性的时候我突然想到，乳酸菌是一种存在于人类体内的益生菌，能够将碳水化合物发酵成乳酸，帮助消化，有助人体肠脏的健康。由于广谱和强力的抗菌素的广泛应用，使人体肠道内以乳酸菌为主的益生菌遭受到严重破坏，就会出现消化不良等一系列的问题。那么，我们是不是也可以从香烟对乳酸菌的危害中，间接了解香烟对于消化系统的影响呢？ 二、实验材料 （1）试剂 ①改良TJA培养基（按GB/T4789.35-2003规定） ②灭菌蒸馏水 ③某种品牌的香烟一包 ④某种品牌100ml装脱脂酸奶一瓶 （2）仪器 恒温培养箱；冰箱；架盘天平；灭菌培养皿若干；灭菌镊子；锥形瓶；试管；试管架；移液枪及枪头；震荡器。 三、实验步骤 （1）配制改良TJA培养基1000毫升，分装在三个大锥形瓶中。配方如下： 番茄汁酵母 抽提液牛肉膏乳糖葡萄糖磷酸 氢二钾吐温-80乙酸钠琼脂50 mL5g10 g20 g2g2 gl g5g15g最后加水定容至1000ml，测量pH6.8士0.2左右。 另制备0.5%的琼脂溶液以备覆盖在TJA培养基表层。 （2）制备不同浓度的烟草浸出液 ①将单支烟在水中浸泡三小时，得到烟草浸出原液。 ②取10ml烟草浸出原液，加蒸馏水稀释至50ml，得到稀释5倍的烟草浸出液。 ③取5ml烟草浸出原液，加蒸馏水稀释至50ml，得到稀释10倍的烟草浸出液。 （3）将培养基和烟草浸出液分装好后，与培养皿、试管一道在120℃条件下灭菌20 min。 （4）制备乳酸菌稀释液 ①在超净工作台上，用移液枪吸取0.1ml脱脂酸奶，稀释至10ml，在震荡器上震荡均匀，得到10-2稀释液。 ②取0.1ml 10-2稀释液，稀释至10ml，得到10-4稀释液。 ③取0.1ml 10-4稀释液，稀释至10ml，得到10-6稀释液。 ④取1ml 10-6稀释液，稀释至10ml，得到10-7稀释液。 ⑤取0.1ml 10-6稀释液，稀释至10ml，得到10-8稀释液。 （5）预接种 取酸奶原液和10-2、10-4、10-6、10-7、10-8倍的稀释液各1ml，分别注入各个培养皿内，做好标记。待TJA培养基冷却至50℃左右时，倒平板，转动培养皿使菌液与培养基混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃左右的恒温箱内培养三天，观察乳酸菌菌落生长状态和数目，挑出能够计数的平板。 我们预接种显示，原液——10-6条件下乳酸菌在平板上生长都过密，10-8太稀因此下一步实验选用10-7倍的乳酸菌稀释液。 （6）在每组培养皿上倒入以下几种试剂，转动均匀： ①对照组：TJA培养基+1ml 10-7乳酸菌稀释液； ②烟草原液：TJA培养基+1ml 10-7乳酸菌稀释液+1ml 烟草原液； ③稀释5倍的烟草浸出液：TJA培养基+1ml 10-7乳酸菌稀释液+1ml 稀释5倍的烟草液； ④稀释10倍的烟草浸出液：TJA培养基+1ml 10-7乳酸菌稀释液+1ml稀释10倍烟草液； （7）待待琼脂凝固后，浇上一层琼脂隔离空气。翻转平板，置36℃左右的恒温箱内培养三天，观察各组乳酸菌菌落生长状态和数目，进行比较，得出结论。 （8）为了增加结果的科学性，随机抽取平板上的5个菌落做过氧化氢酶检测，并用革兰氏染色观察细菌的形态，以确定平板上生长的是乳酸菌。 四、实验结果 （1）培养皿底为黄色，上面生长的菌落湿润微白色，边缘不是很整齐，像一团团小棉絮。从菌落的特点上可初步确定生长的是乳酸菌。 （2）菌落中挑出的细菌过氧化氢酶阴性，革兰氏染色的照片如下图所示： 从图中可以看出，细菌经染色后呈紫色杆状，革兰氏染色阳性，符合乳酸菌的特点。综合菌落的特点、过氧化氢酶检测结果和染色镜检，可以确定生长的是乳酸杆菌，