全自动酶解-高效移液萃取（DPX）-液相色谱质谱质谱.PDF

全自动酶解-高效移液萃取（DPX）-液相色谱/质谱/质谱 （LC/MS/MS）联用分析尿液样品中的疼痛治疗药物 Fred D. Foster, John R. Stuff, Edward A. Pfannkoch GERSTEL, Inc., 701 Digital Dr. Suite J, Linthicum, MD 21090, USA William E. Brewer Department of Chemistry and Biochemistry, University of South Carolina, 631 Sumter St. Columbia, SC 29208, USA 关键词 样品制备，液相色谱/质谱/质谱（LC/MS/MS），高通量全自动化，高效移液萃取（DPX）， 尿样，葡萄糖苷酸 摘要 许多疼痛治疗药物的新陈代谢主要机理都包含分析物与葡萄糖醛酸的结合。当测定尿液 基质中的药物浓度时，为了获得准确的分析结果，分析物必须解离，常用的方法是利用酶（例 如 β-葡萄糖醛酸酶）将分析物水解。典型的水解过程需要将样品在恒定的温度下保持很长 的时间，通常也是手动操作。 本文介绍了一种高通量全自动测定常见疼痛治疗药物的分析方法，通过 GERSTEL 多功 能样品前处理平台（MPS）可轻松地实现全自动的酶解过程，并结合全自动萃取、净化过程 后，直接将样品引入至 LC/MS/MS。 引言 临床及法医学领域的化学家们通常需要在分析样品前进行一系列复杂的样品处理过程， 以保证尿样中分析物浓度测定的准确性。这些复杂的样品处理过程通常始于酶解（例如使用 β-葡萄糖醛酸酶水解）， 目 的是将分析物从结合形式转变为原始药物形式。为了保证水解过 程的完整性及好的重现性，针对于特定的酶，需要优化及控制水解过程的 pH 值、温度及水 解时间。 为了得到药物化合物及代谢物的低检出限，通常需要去除样品基质干扰。这些干扰物通 常产生于水解过程，或自然生成于尿液中。在法医分析学领域，固相萃取（SPE）被广泛用 于水解后尿液样品的制备及净化。大多数 SPE 过程需要的溶剂量相对较大，处理样品时间 长，从而增加了每个样品的成本，检出限较高。 高效移液萃取（DPX）作为一种可替代传统 SPE 的方法，可利用少量的溶液，高效、 快速地完成萃取过程。DPX 是一种新型的萃取技术，将松散的固定相置于吸管内，吸管内 的固定相与样品高效地接触后，快速地将被测物质萃取出来。DPX 技术的主要优势有：萃 取速度快、回收率高、溶剂使用量非常小、全自动化的萃取过程及进样过程。 全自动的水解、萃取过程、及随后的 LC/MS/MS 分析，实现了尿样中药物分析的高通 量。利用 GERSTEL MPS，可全自动化实现如下操作：转移酶解过程中所有溶液，控制样品 温度及恒温时间，通过 DPX、利用 DPX-RP-S 专利吸附剂萃取尿样中水解后的被测物质， AN-2014-01 第 1 页 直接将 DPX 洗脱液引入到 LC/MS/MS。 实验部分 材料： 表1中所列所有化合物的储备溶液均购于Cerilliant。将葡萄糖苷酸共轭物储备液用水稀 释至合适浓度制成中间浓度的储备溶液，用于评价不同的分析物。 氘 代物 d3-Morphine ， d3-Morphine-3-β-D-glucuronide ， d5-Oxazepam ， d5-Oxazepam glucuronide，d3-Oxymorphone，d3-Oxymorphone-3-β-D-glucuronide 购于 Cerilliant。中间浓 度的内标储备溶液由内标储备液和甲醇水溶液（1：1）稀释而成。