养殖水体中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法.tcs-DB21.PDF

ICS 71.040.40 B 04 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB 21/T 2410—2015 养殖水体中氯霉素残留量的测定 高效液相色谱串联质谱法 Determination of chloramphenicol residues in aquaculture water by HPLC-MS/MS method 2015 - 01 - 22发布 2015 - 03 - 22实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 2410—2015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则起草。 本标准由大连市水产技术推广总站提出。 本标准由辽宁省海洋与渔业厅归口。 本标准起草单位：大连市水产技术推广总站。 本标准主要起草人：张秀妍、王骏、丁勇、刘彤、马琳、郝佳。 DB21/T 2410—2015 1 养殖水体中氯霉素残留量的测定 高效液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了养殖水体中氯霉素残留量的测定原理、试剂制备、测定步骤和结果计算。 本标准适用于渔业生产养殖水体中氯霉素残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品中的氯霉素用乙酸乙酯液液萃取，反相色谱柱分离，质谱检测器检测，内标法定量。 4 试剂 4.1 乙酸乙酯：色谱纯 4.2 甲醇：色谱纯 4.3 甲醇水溶液[1+1]:100mL甲醇加入 100mL水中，超声混匀。 4.4 标准品：氯霉素，纯度≥99.5%。 4.5 氘代氯霉素内标标准溶液：100μg/mL。 4.6 标准溶液 4.6.1 氯霉素标准储备溶液[1.0mg/mL]：准确称取 25.00mg的氯霉素标准品，用甲醇定容到 25.00mL， 配制成 1.0mg/mL的标准储备溶液，该溶液于-18℃避光保存，有效期为 6个月。 4.6.2 氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]:准确量取 100μL氯霉素标准储备溶液（4.6.1）于 100mL容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃避光保存，有效期为 2周～3周。 4.6.3 氯霉素标准使用溶液[50 ng/mL]:准确量取 0.5mL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于 10mL容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于 4℃保存，有效期为 1周。 DB21/T 2410—2015 2 4.6.4 氯霉素标准使用溶液[10ng/mL]:准确量取 100μL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于 10mL容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于 4℃保存，有效期为 1周。 4.6.5 氘代氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]：准确量取 1mL氘代氯霉素标准溶液（100μg/mL）于 100mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃避光保存，有效期为 2～3周。 4.6.6 氘代氯霉素标准使用溶液[100ng/mL]：准确量取 10mL氘代氯霉素标准中间溶液（4.6.5）于 100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于 4℃避光保存，有效期为 1周。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱-串联质谱联用仪。 5.2 电子天平：感量 0.01mg。 5.3 溶剂过滤器。 5.4 混合纤维素酯水性滤膜：孔径 0.45μm。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 旋涡振荡器。 5.7 超声振荡器。 6 测定步骤 6.1 样品处理 6.1.1 将水样经混合纤维素酯滤膜过滤。 6.1.2 量取过滤的水样 250.0mL，置于 500mL分液漏斗中。向分液漏斗中加入 50.0µL氘代氯霉素标 准使用溶液（4.6.6），振摇混匀。 6.1.3 加入 50mL乙酸乙酯，剧烈振摇 3min，静置分层。将下层水样放入烧杯中。用滤纸卷吸干锥形 分液漏斗管颈内水分，乙酸乙酯萃取液放入 125mL鸡心瓶中。 6.1.4 将萃取过的烧杯中的水样倒回原分液漏斗，重复萃取步骤（6.1.2）一次。合并乙酸乙酯萃取液 于上述 125mL鸡心瓶中， 45℃±2℃水浴中减压浓缩至近干。 6.1.5 向鸡心瓶中加入 1.0mL甲醇水溶液（4.3），涡旋振荡 1min、超声振荡 1min，样液经 0.22µm 针孔式有机相滤膜过滤后供高效液相色谱-串联质谱联用仪测定。 6.2 空白试验 量取250.0mL纯水，按样