哺乳动物转基因技术新存在的主要问题.pptVIP

四、哺乳动物转基因技术存在的主要问题 1、效率低，成本高 2、外源基因的随机整合和异常表达 3、转基因与动物保护的矛盾 4、转基因动物释放及生物安全 ;四、哺乳动物转基因技术的发展趋势 1、提高效率，降低成本 2、加强基因顶点郑和技术研究 3、转基因技术的发展将对人类产生深刻的影响;第五节 性别控制技术 Sex control;一、性别控制的定义和意义 （一）定义：指通过对动物正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一种繁殖新技术。 受精之前——通过在体外对精子进行干预，使在受精之前便决定后代的性别。 受精之后——通过对胚胎性别鉴定，从而获得所需性别的后代。;（二）性别控制的意义： 1、可使受性别限制的生产性状（如泌乳性状）和受性别影响的生产性状（如肉用,毛用性状等）能获得更大的经济效益。 2、可增强良种选种中的强度和提高育种效率,以获得最大的遗传进展。 3、对人类来说,通过精子性别的选择,可以避免怀孕一个与X相关隐性疾病的婴儿。而与X相关的隐性疾病至今已有370多种。;畜牧业：提高畜牧业生产的效率;二、性别控制技术的发展概况;三、哺乳动物的性别控制技术 （一）X、Y精子的分离 1、 X、Y精子的差异DNA含量 DNA含量的差异是由于性染色体的不同所引起，但因测定方法的不同而引起测定值各异。1968年，Schilling用沉淀法分离精子，他发现沉。淀于下层精子的DNA含量高于上层的精子，但DNA含量之差却因测定方法不同而异。用显微光谱法测定时为3.7％，用福尔根法测定时为0.3％，用紫外线分光镜测定时为4.9％。随后的研究表明，这一差值并不是因为X精子、Y精子的不同而引起的，若以单倍体的平均DNA含量的百分比表示，则X精子、Y精子DNA含量差值在所有动物都介于2.5％一4.5％之间。随着流式细胞分类器的问世，人们已成功分离出含DNA多的X精子和含DNA少的Y精子。 ;2、X精子与Y精子的分离技术;各种动物X、Y染色体DNA含量差异;精子分离流程示意图;精子分离Chamber;（二）早期胚胎的性别鉴定 1、核型分析法：细胞遗传学方法又称为核型分析法。常采用切割胚，一半用于鉴定性别，一半用于冷冻或移植。其基本原理是取一部分细胞，先用秋水仙素处理，再固定染色，检查性染色体，根据人色体中期的谱带差异、Y染色体的大小及形态判断性别，准确绿达100%。但过程复杂，且要求操作人员有丰富的经验。 ;胚胎性别鉴定;3、免疫学方法 免疫学方法是指利用H-Y抗血清或H-Y单克隆抗体检测胚胎上是否存在雄性特异性H-Y抗原，从而进行胚胎性别鉴定的一种方法。细胞毒性分析法、间接免疫荧光法和囊胚形成抑制法。 1、细胞毒性分析法：在补体（豚鼠血清）存在的情况下，H-Y抗体可以与H-Y阳性雄性胚胎结合，使卵裂球溶解，破坏胚胎的发育。 2、间接免疫荧光法：间接免疫荧光法是以H-Y抗体作为第一抗体，以异硫氰酸荧光素（FLTC）标记的山羊抗鼠r-球蛋白作为第二抗体。将上述两种抗体依次与胚胎共同 培养，雄性胚胎上的抗原先与第一抗体结合，第一抗体再与第二抗体结合，通过洗涤，将没有结合到胚胎上的第二抗体去除，由于第二抗体是荧光标记的，所以在荧光显微镜下观察，有荧光的为雄性胚胎，无荧光的为雌性胚胎。 3、囊胚形成抑制法： H-Y抗体可以可逆性的抑制囊胚的形成。;四、性别控制技术的发展前景 提高精子分离的速度。 提高SRY-PCR的??敏度和可操作性。