蛋白质的4级结构.ppt

四 蛋白质的四级结构 (quaternary structure);蛋白质分子由两条或两条以上肽链组成，每条肽链各自形成了独立的三级结构，分子中的每一个具有独立三级结构肽链,称为亚基; 第三节 蛋白质结构与功能的关系;牛胰核糖核酸酶的变性与复性;1.一级结构相似的蛋白质功能相似 一级结构不同的蛋白质功能不同;ACTH 促肾上腺素皮质激素;HbS与HbA的区别;由4个亚基组成; 二、蛋白质空间结构与功能的关系;O2;O2;变构效应;血红蛋白与氧结合的正协同效应;第四节 蛋白质的理化性质;蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值;蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体;蛋白质的聚沉;（三）蛋白质的变性、沉淀与凝固;常见的变性因素：;变性蛋白质的主要特征:;除去变性因素后，有的变性蛋白质又可恢复其天然构象和生物活性，这一现象称为蛋白质的复性;当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀。;(1) 盐析法( salting out);(2) 有机溶剂沉淀法;重金属离子如Cu2+、Hg2+、Ag2+、Pb2+等带有正电荷，能与蛋白质分子中带负电的基团结合，生成不溶性的重金属蛋白盐而沉淀;生物碱试剂(如鞣酸、苦味酸、钨酸等)，某些酸类(主要是指三氯醋酸、磺酰水杨酸和硝酸等)，与带正电的蛋白质 结合生成不溶性的盐而沉淀;3. 蛋白质的凝固作用;二、 蛋白质的分离纯化;分类：根据支持物的不同，电泳电泳可分为： 薄膜电泳、凝胶电泳……　;利用压力或离心力强行使水和小分子杂质通过超滤膜(一种半透膜)除去，而蛋白质留在膜上，称为超过滤;透析工作图;层析种类： 凝胶过（分子筛） 离子交换层析（阴离子和阳离子） 亲和层析;带正电荷多蛋白紧密结合;分子筛层析;亲和层析工作示意图;(六)超速离心;三、多肽链中氨基酸的顺序分析;a.丹磺酰氯法 　　丹磺酰氯是一种强荧光剂，它能专一地与链N-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光，可直接用电泳法或层析法鉴定出N-端是何种氨基酸。;2.C末端的测定;第三步 肽链的局部水解;CNBr与Met反应测定Pr的一级结构 ;层析鉴定就可N-端开始确定被测肽段的氨基酸排列顺序;Edman降解法的示意图;　 一般常用多种方法使肽链断裂，并分析出各肽段中的氨基酸顺序。由于在不同部位断链，只要找出多套肽段的重叠部位，然后组合排列对比，即可推断肽段的排列顺序，从而得出完整肽链中氨基酸的顺序;则其氨基酸排列顺序为： 　Thr-Asn-Val-Lys-Ala-Trp-Gly-lys;四、蛋白质空间结构的测定;Part 1 练习 组成蛋白质的基本单位是什么？ 什么是等电点？;Part 2 练习 分子筛层析时，先流出的是较大的蛋白还是较小的蛋白？