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粒编码人β-珠蛋白基因将Lykke被J -安德森提供 （科罗拉多大学）。质粒包含所有编码外显子和内含子 人β-珠蛋白，国税厅54的β-珠蛋白的5UTR，69β-珠蛋白的3UTR其次是新界南 24 MS2的结合位点重复序列克隆到的HindIII，XbaI位点的载体pcDNA3 （Invitrogen公司）。为方便克隆，序列5atcgatggtaccgctagcgatatcctcgag与多个克隆网站 3引入的XbaI和ApaI之间的地盘， 产生质粒β-珠蛋白- 24bs / -.各种3UTRs小鼠进行PCR扩增 基因组DNA（BDbiosciences Clontech公司）的引物进行适当的限制 地点，并展开调查NheI和XhoI位点（为pkp4和rab13 3UTRs）或结扎 到的XbaI和ApaI位点的β-珠蛋白- 24bs /（用于RAC1和RhoA的3UTRs） - 质粒，产生质粒β-globin-24bs/pkp4，β-globin-24bs/rab13，β- globin24bs / RAC1和β-globin-24bs/rhoA。对应的确切3UTRs：国税厅的3858-4612 NM_026361（pkp4非编码区），新界南总的NT_039254（rab13非编码区）91295-92092，新界南总776-2240的 NM_009007（rac1的非编码区）和NTS的NM_016802（RhoA的非编码区）2009至71年。要生成 质粒β-globin-0bs/pkp4和β-globin-0bs/rab13，质粒β-globin-24bs/pkp4和βglobin- 24bs/rab13分别与NotI双和NheI消化（删除 片段含有24 MS2的结合位点）的两端分别用T4 DNA减弱 聚合酶和religated。要生成结构rab13/rab13和rab13/rhoA中， 基因组序列包含了编码外显子和内含子干预基因的rab13 PCR扩增小鼠基因组DNA引物引入酶切站点 5端和3 KpnI在网站的结束。一个标志，标签的EcoRI结扎在现场 框架与rab13的ORF。 3UTR区的rab13 RhoA的3UTR区或在结扎 KpnI网站通过钝端结扎。这两个产生的碎片结扎成 载体pEGFP - C1载体的绿色荧光蛋白序列从先前已删除。 质粒pcNMS2，含一齐聚缺陷的MS2的外壳蛋白突变体， 已被描述previously32。绿色荧光蛋白序列的PCR扩增质粒 载体pEGFP - N3组（Clontech公司）与引入BamHI和XhoI位点在引物和结扎 与含有SV40大T -银免入息审查寡XhoI位的网站。在GFP的免入息审查片段 结扎成pcNMS2的BamHI和NotI双点生成pcNMS2 - GFPNLS MS2的表达质粒，绿??色荧光蛋白。利福平-微管蛋白的产生 载体pEGFP -微管蛋白（Clontech公司），取代了PCR的NheI / XhoI位绿色荧光蛋白片断 扩增mRFP片段。要生成eB1的- GFP和eB1的，利福平表达质粒， 鼠标eB1的基因扩增引物共NIH/3T3细胞RNA的RT - PCR检测 在5端引入KpnI网站和在3端BglII网站。该eB1的片段 或者结扎成KpnI /酶切的载体pEGFP - N3或到KpnI / XhoI位点的载体pcDNA3网站 （Invitrogen公司）连同BglII / XhoI位PCR扩增片段的mRFP。质粒 表达GFP的装甲运兵车是由一Nathke（邓迪大学）。该 商检局/ APC的片段酶切结扎与NheI /商检局片段含有3份 橙色荧光蛋白（OrFP）（通过连续生成和PCR扩增 结扎个人OrFP片段）进入pKH3的XbaI和BamHI位点 产生质粒3xOrFP，装甲运兵车。要生成利福平- FMRP的，表达质粒GFPFMRP 被使用（由R.达内尔，洛克菲勒大学提供）和NheI /商检局 片段，编码绿色荧光蛋白，被换成了一个NheI /商检局PCR扩增片段 mRFP。要生成从旗FMRP的，在商检局/酶切片段编码FMRP的（ 利福平- FMRP的质粒）结扎与NheI /商检局片段编码一起旗 标签进入pKH3的XbaI位/ EcoRI位点。要生成利福平- Dcp1b，表达质粒 旗Dcp1b被使用（由J.将Lykke -安德森，美国科罗拉多大学提供）。该 酶切（用T4 DNA聚合酶迟钝）/ NotI双片段编码人Dcp1b是 结扎的和mRFP酶切/ NdeI（用T4 DNA聚合酶迟钝）片段为 的载体pcDNA3和NotI酶切位点。 对于击倒实验，针对不同的寡核苷酸的合成