分子生物学在内科领域应用.doc

分子生物学在内科领域的应用 PAGE  PAGE 3/ NUMPAGES 3 分子生物学在内科领域的应用 近年来分子生物学的若干进展人类基因组计划 蛋白质组计划（proteome） 转基因技术的发展与应用：为生命科学的研究与发展提供了一个前景广阔的应用平台。 1.促进生长 2.刺激肌肉发育3.促进产毛4.生产药物 5.抗病育种 6. 组织器官移植 7. 动物生物反应器8. 英国培育出转基因羊可产人体血清白蛋白 基因诊断：高通量、高质量、快速、同步检测。 PCR， 基因芯片、时空优越性、在基础研究的基础上水平逐渐提高、应用越来越广泛 基因治疗： 任重而道远 基因治疗爱滋病的曙光、基因治疗帮助盲狗恢复了视力、基因治疗可望取代骨髓移植、试管婴儿经基因治疗培育无癌娃娃、战胜流行病魔的尚方宝剑-基因工程疫苗、治疗性克隆获得进展、基因疫苗--防治疾病的新武器 基因工程制药 份额越来越大干细胞 ■世界首例成人神经干细胞自体移植成功（复旦大学附属华山医院） ■胚胎性干细胞定向诱导分化--新崛起的细胞工程 ■干细胞帮助瘫痪小鼠行走 肠细胞移植至脊髓可使脊椎神经重生 单核苷酸多态性（SNP） 克隆（clone）技术 端粒、端粒酶分子生物学研究进展 RNA干扰技术 RNA干扰（RNA interference ，RNAi）是指导入针对目标基因的特异性同源双链RNA引起目标基因的不表达或减效表达. RNAi 在自然界中的作用? 生物体内的双链RNA可来自于RNA病毒感染，转座子的转录产物，外源导入的基因。这些来源的双链RNA诱发了细胞内的RNAi机制，结果是病毒被清除，转座子的表达被阻断，外源导入基因表达被阻断，保护细胞免受影响。 参与RNAi反应的酶 RNA酶Ⅲ是一种能切割双链RNA的酶，参与RNAi反应的Dicer酶是RNA酶Ⅲ家族的一个成员。 Dicer酶广泛存在于蠕虫，果蝇，真菌，植物及哺乳动物体内。 它的结构中包括一个螺旋酶结构域，两个RNA酶Ⅲ结构域，一个双链RNA结合位点。 在Dicer酶的作用下，双链RNA被裂解成21到23个核苷酸的片断，称为siRNA（short interference RNA），它启动了细胞内的RNAi反应。 RdRP(RNA dependent RNA polymerase) 由于少量的双链RNA就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中，研究者们推测细胞内存在RNAi效应的扩增系统。 在真核细胞中也存在能以RNA为模板指导RNA合成的聚合酶（RdRP）。 使异常的RNA转变为dsRNA 扩增dsRNA或siRNA 在RdRP的作用下，进入细胞内的双链RNA通过类似于PCR的反应过程，呈指数级的数量扩增。但是目前认为这个现象并不存在于哺乳动物细胞中。 RNAi 的优势 dsRNA 作为干预对象 (稳定) 高度特异 作用力强 (少量 dsRNA 即可发挥) 在离开导入部位的细胞和组织中dsRNA也可发挥干预的活性 RNAi的应用 高通量的研究基因功能 基因敲除 基因治疗：抗肿瘤治疗、抗病毒治疗 基因表达调控 基因敲除 对于哺乳动物，RNAi能在体外培养的细胞达到基因敲除的效果，对于一些敲除后小鼠在胚胎时就会死亡的基因，可以在体外培养的细胞中利用RNAi技术研究它的功能。 由于RNAi能高效特异的阻断基因的表达，它成为研究信号传导通路的良好工具。 RNAi还被用来研究在发育过程中起作用的基因，如可用RNAi来阻断某些基因的表达，来研究他们是否在胚胎干细胞的增殖和分化过程中其起着关键作用。 基因治疗 目前抑制基因表达常采用反义技术或转入没有功能的突变体与该基因竞争。这两种方法对基因表达的抑制都不如RNAi高效特异持久。 作为基因治疗的工具，RNAi既高效特异，又简便易行。RNAi在某个基因表达异常增高引起的疾病中会非常有用，如病毒感染，肿瘤等。 抗病毒治疗 同RNA核酶、反义RNA等相比，RNAi具有高度特异性，一个碱基的不同就可导致作用的显著降低。 具有高效性，少量siRNA分子就能较彻底抑制细胞内相应基因的表达。 因此，RNAi被大量应用于抗病毒的研究中去。 基因表达调控 RNAi在Epigenetics中发挥重要作用。 Epigenetics是指至少一代的基因表达的改变，而基因的编码没有改变。epigenetics调控的一种类型是染色体的改变。通过改变染色体的空间构型，能够决定那一个基因表达。研究发现siRNA在染色体空间构型的改变中起着非常重要的作用。 RNAi能永久的关闭基因的表达，而不仅仅是短期的抑制它。通过在发育过程中关闭或开放基因的表达，siRNA可能指导着细胞的定向分化。RNAi已被证实能引导植物干细胞的