疏水修饰海藻酸钠纳米粒的制备及鉴定.doc

海　洋　科　学　集　刊 董学猛等：疏水修饰海藻酸钠纳米粒的制备及鉴定 PAGE 6 PAGE 7 第４９集　　　　　　　　　　　　　海　洋　科　学　集　刊　　　　　　　　　　　　　No.49 2008年８月　　　　　　　　　　 　STUDIA MARINA SINICA Aug,2008 *通讯作者：刘晨光，副教授。中国海洋大学海洋生命学院科学院203室，电话：0532E-mail:liucg@ouc.edu.cn 第一作者：董学猛，硕士。中国海洋大学海洋生命学院2005级海洋生物学硕士。 收稿日期：2007年１０月２０日。 疏水修饰海藻酸钠纳米粒的制备及鉴定 董学猛 刘晨光 (中国海洋大学海洋生命学院, 青岛 266003) 疏水修饰的水溶性聚合物的聚合两亲性分子,在水相中能够通过分子间和分子内的疏水部分之间的相互交联自发的形成胶束或自聚集体。这种纳米级自组织体有一些独特的性质，如特异的流变学属性，相当窄粒径分布，核壳结构，比低分子量表面活性剂更低的临界聚集浓度（CAC）以及热力学稳定性等（Akiyoshi et al., 1996；Kuroda et al., 2002；Kim et al., 2005）。最近，来自天然多糖的自聚集纳米粒由于其良好的生物相容性，生物可降解性，低毒副作用受到人们的特殊关注（Kim et al., 2006）。Kwon 等（2003）以胆固醇为疏水基共价链接到乙二醇壳聚糖上，这种两亲性分子在水液中可以自聚集形成纳米球，而且这种纳米球可以作为潜在的疏水药物和蛋白的载体。 海藻酸钠(Sodium Alginate，SA)是一种线性阴离子多糖，作为一种生物高聚物，海藻酸钠具有很多的优点，比如高的生物相容性、生物可降解性，无毒性，非免疫原性，可鳌合性以及易于化学修饰等。钙离子交连的海藻酸钠凝胶已经广泛用于细菌、蛋白、寡核苷酸或DNA的包载 （Ferreiro et al., 2002；Gombotz et al., 1998；Quong et al., 1998；Simpson et al., 2006；Vandenberg et al., 2001 ）和作为软骨组织工程支架（Iwasaki et al., 2004；Wang et al., 2003）。 本文作者以脱氧胆酸（DOCA）为疏水基，通过酰胺键将DOCA共价链接到海藻酸钠上，合成了脱氧胆酸－海藻酸钠（DSA）耦合物。利用动态激光散射、原子力显微镜和荧光探针技术研究了两亲性DSA耦合物在液相??境中的物理化学性质。脱氧胆酸由于其两亲性可以在水溶液中形成胶束。所以在此我们希望脱氧胆酸疏水修饰的海藻酸钠可以自聚集形成纳米粒。 材料与方法 1.材料、试剂、仪器 海藻酸钠（SA）购自青岛晶岩生物科技开发有限公司，色泽乳白色；脱氧胆酸（DOCA）来自上海国药集团化学试剂有限责任公司，白色粉末，未进一步纯化；1－乙基－（3－二甲基氨丙基）碳二亚胺盐酸盐 （EDC?HCl），N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS)，N,N’-二环已基碳二亚胺 (DCC)买自上海共价化学科技有限公司，分析纯；N’N-二甲基酰胺 (DMF)，甲酰胺，四氢呋喃 (THF)，正己烷，乙二胺，无水乙醇 均为国产商品试剂 AR级；芘(Pyrene) 购自美国Sigma 公司，在无水乙醇中再结晶纯化；超声波细胞粉碎机，荧光分光光度计，动态激光光散射仪，原子力显微镜，JEOL JNM2ECP 600核磁共振仪。 2.方法 （1）海藻酸钠分子量的测定 海藻酸钠0.5g，溶于0.1M NaCl中，配置成0.1％的溶液，然后用乌氏粘度法25℃测定其粘度。分子量计算公式为 M=58×216η M表示分子量，η表示特性粘度。 （2）海藻酸钠的降解 此试验参照梁平方等（1995）方法。取海藻酸钠，加入10倍量（W：V）的盐酸乙醇混合液（V盐酸：V乙醇=9:1），搅拌浸泡24h，弃去浸泡液，加入与浸液同量的盐酸乙醇混合液，60℃水浴2h；过滤得到沉淀，蒸馏水洗至pH3～4，再用2M NaOH在60%～70％乙醇中转化，调至pH8.5，维持0.5h；然后加入两倍体积的95％乙醇，静置0.5h，过滤，用70%～80％乙醇洗至pH7左右，加无水乙醇脱水，干燥。 （3）脱氧胆酸的活化 此试验参照 Park等.(2004)方法。称取DOCA 3.54g，DCC 2.22g，NHS 1.35g，溶于30ml的四氢呋喃中，真空，搅拌反应12h；滤掉白色沉淀，向清液中加入过量的正己烷，得白色沉淀，真空干燥。取干燥好的脱氧胆酸（3g）溶于DMF（10ml）中，将其滴加至无水乙二胺中（40.2ml），