锰对人脐静脉内皮细胞及半胱天冬酶表达影响的论文.docVIP

　　锰对人脐静脉内皮细胞及半胱天冬酶表达影响的论文 【关键词】锰;人脐静脉内皮细胞;凋亡;半胱天冬酶3(caspase3);半胱天冬酶8(caspase8) 　　摘要：目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系huvec-304细胞生长周期及半胱天冬酶3(caspas3)、半胱天冬酶8(caspase8)表达的影响。方法以100～800μmoml/l)的氯化锰分别处理huvec-304细胞24～72h后，四甲基偶氮噻唑蓝(mtt)法检测evc-304细胞的生长活性；流式细胞仪（fcm）检测细胞凋亡情况；蛋白印迹法（ol/l作用24h时caspase8、caspase3的表达。结果氯化锰可呈时间及剂量依赖性抑制huvec-304细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为2234%～9094%，凋亡率为1020%～9873%。氯化锰24hic50约为400μmol/l，在此浓度下，huvec-304细胞caspase8、caspase3表达显著增高,(plt;005)。结论氯化锰能够抑制huvec-304细胞的增殖，呈明显的时效和量效关系。caspase8、caspase3表达增高在细胞增殖和凋亡中起重要的作用，可能是其作用机制之一。. 　　关键词：锰;人脐静脉内皮细胞;凋亡;半胱天冬酶3(caspase3);半胱天冬酶8(caspase8) 　　effectofmanganeseongroentofpreventivemedicin,medicalcollege,anganeseongroethodshuvec304cellsncl2.theinhibitoryratioeasuredbymttassay.apoptosisetry(fcm).theexpressionofcaspase3andcaspase8easuredbyttresultsrevealedthatmanganesechloride(from100to800μmol/l)mightsuppresstheproliferationofhuvec-304cells(inhibitoryratioe-dependentmanner.theresultofanganeseinhibitedcaspase3andcaspase8expression(plt;0.05).conclusionmanganesecaninhibitproliferationofhuvec-304cellse-anddose-dependentmanner.thesemaybeoneofimportantmechanismsthatmanganesesuppressedtheproliferationofhuvec-304cellsandinducedapoptosis. 　　keyanganese;huvec-304cells;apoptosis;caspase3;caspase8 　　锰可以通过诱导细胞产生不配对的电子自由基形成大量的过氧化物及影响细胞能量代谢等途径诱导细胞凋亡而发挥毒性作用〔1,2〕,但对细胞凋亡相关基因半胱天冬酶8(caspase8)、半胱天冬酶3(caspase3)及蛋白产物的影响研究较少。本研究通过体外试验，观察锰对人脐静脉内皮细胞系huvec-304细胞生长及caspase8、caspase3表达的影响，探讨锰诱导细胞凋亡分子机制。 　　1材料与方法 　　11主要试剂及抗体氯化锰(天津博迪化工有限公司)，分子量1977,纯度gt;99%,溶解于二甲基亚砜（dmso），分装备用。rpmi-1640培养基(美国gibco公司)；胎牛血清025%的胰酶(中山凌飞公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(mtt,美国sigma公司)。caspase3、caspase8一抗为鼠抗人，二抗为羊抗鼠(美国晶美生物工程有限公司)。 　　12方法 　　121细胞和细胞培养huvec-304细胞株(武汉大学细胞保藏中心)。在含有10%的胎牛血清、青霉素100u/ml及链霉素100mg/ml的rpmi-1640培养基中37℃、5%co2条件下传代培养。取对数生长期、生长良好、细胞活性大于98%的细胞进行实验。 　　122细胞生长活性检测采用mtt比色法，取对数生长期的huvec～304细胞进行实验，将不同浓度的氯化锰100～800μmol/l加入10%胎牛血清（fcs）的rpmi-1640的培养基中，调细胞浓度为5×105/ml，接种于96孔，每种剂量浓度为一组，每个浓度3个平行孔，置37℃、5%co2培养箱培养不同时间（24，48，72h）后，每孔加20μlmtt，培养4h，弃mtt，每孔加dmso150μl，充分溶解。选择490nm波长，酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度(a)值。huvec-304