葛根含药血清对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞.doc

葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究 罗新新，徐国良，黎宇，李冰涛，涂珺[基金项目] 国家自然科学基金；江西省自然科学基金重点项目(20143ACB20010)；江西省教育厅科研项目（GJJ14611） [第一作者] 罗新新，硕士在读。研究方向：药理学，Tel:0791E-mail： HYPERLINK mailto:719262619@ 719262619@ [通讯作者] 涂珺，博士，教授，Tel:0791，E-mail：jtu2012@163.com （江西省中医病因学重点实验室，江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心，江西南昌 330004） [摘要]：本实验通过检测葛根对胰岛素抵抗（IR）3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗，甘油三脂（TG）含量及PPARγ、ADPN、GLUT4、LPL、FABP4和FASn表达量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作用机制。先采用3T3-L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞，地塞米松诱导建立IR模型，将脂肪细胞分为正常组、IR模型组、罗格列酮阳性组、低、中、高剂量葛根含药血清组，以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（Glucose oxidase-peroxidase, GOD-POD）法法检测细胞培养液葡萄糖含量和甘油磷酸氧化酶法测定胞内TG含量，荧光定量qPCR检测PPARγ、ADPN、GLUT4、LPL、FABP4（aP2）和FASn基因mRNA水平。实验结果显示1μmol·L-1 地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞96h，正常组与模型组消耗量差值最大，确认建立IR模型。与正常组比较，IR组葡萄糖消耗量降低(P0.01)，胞内TG含量增加(P0.01)；与IR组比较，葛根含药血清干预IR细胞24h葡萄糖消耗量上升(P0.01)，胞内TG含量降低(P0.01)，中高浓度葛根含药血清升高PPARγ和ADPN表达(P0.01)，两者基因表达呈现一致性，中高剂量也显著升高GLUT4表达（P0.01）。脂代谢相关基因检测结果显示仅高浓度葛根含药血清显著升高LPL表达(P0.05)；各剂量葛根含药血清下调FABP4表达（P0.01）；中高剂量的葛根含药血清上调FASn基因表达（P0.01）。本实验表明葛根提高IR-3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力，降低细胞内TG积聚，干预多个重要糖脂代谢基因，推测以PPARγ为中心多靶点调节糖脂代谢改善脂肪IR。 [关键词]：葛根含药血清；胰岛素抵抗；3T3-L1脂肪细胞；糖脂代谢 葛根为豆科植物野葛Pueraria?lobata (Willd.) Ohwi的干燥根，始载于《神农本草经》，具有解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻等功效。统计表明在改善胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)治疗二型糖尿病(Type 2 of Diabetes Mellitus，T2DM)的临床用药中，葛根使用率位于第五位[1]。葛根具备清热燥湿凉血功效，可增强胰岛素敏感性。动物实验数据显示葛根改善ob/ob小鼠糖耐量和脂质代谢[2]。临床数据显示，葛根煎剂联合非诺贝特治疗高脂蛋白血症，能显著降低总胆固醇和甘油三酯（Triglycerides，TG）含量，升高高密度脂蛋白水平，在改善高脂血症病人脂质平和上优于单用非诺贝特治疗[3]。除与西药联合治疗外，与葛根适当配伍的许多中药复方显示良好降糖效果，如葛根芩连汤复方在随机双盲临床实验降低空腹血糖和糖化血红蛋白，显示稳定降糖药效[4-5]。本课题组在均匀设计葛根芩连汤配伍动物实验中发现重用葛根配比能产生更优的降糖降脂药效。葛根的主要药效成分为异黄酮类化合物，包含葛根素，大豆苷元，染料木黄酮等，其中葛根素为葛根特有药效成分，研究已经证明，葛根素具有抗高胆固醇、抗炎、降血糖、神经保护等多种功效，临床实验显示葛根素可降低空腹血糖，促进β细胞分泌胰岛素[6]；动物实验显示其通过降糖，影响细胞信号通路，增加大鼠骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4（Glucose transporter type 4，GLUT4）含量，改善IR[7]。深入研究葛根的调节糖脂代谢改善IR的机制可为葛根配伍的降糖降脂中药复方提供科学依据和理论基础。 血清药理学方法是公认中药复方体外细胞研究的可行性方法，本实验运用血清药理学研究方法，研究葛根含药血清（Ge-Gen containing serum，GG-CS）干预IR-3T3-L1脂肪细胞的降糖降脂药效，并在药效基础上检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferators activated receptor gamma，PPARγ)、脂联素（Adiponectin，ADPN）、GLUT4、脂