马棘70%醇提取物对小鼠巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响的论文.docVIP

　　马棘70%醇提取物对小鼠巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响的论文 作者：胡泽华，郜邦鹏，黄德斌 【摘要】 　　目的探讨马棘70％醇提取物（ipm）的抗动脉粥样硬化作用及机制。方法用不同浓度的马棘、肝素孵育体外培养的小鼠单核巨噬细胞ra对低密度脂蛋白受体（ldl-r）蛋白和mrna表达的影响。结果马棘能明显降低小鼠单核巨噬细胞rarna 表达，且对ox-ldl引起的ldl-r表达降低有保护作用。结论马棘具有降低巨噬细胞ldl-r的表达和逆转ox-ldl的作用，这可能是其抗动脉粥样硬化的重要作用机制。 【关键词】 马棘 巨噬细胞 低密度脂蛋白 　　abstract：objectiveto explore the antiatherogenic mechanism of alcohol extract from indigofera pseudotinctoria matsum (ipm). methodsthe cell or heparin for 12 h that ouse macmphage raent inated after ox-ldl took action for 24 h. the expressions of ldl-r protein and mrna ined by immunohistochemistry or rt-pcr, respectively. resultsthe expression of ldl-r protein and mrna in mouse macrophage ra reinforcemented the expressions of ldl-r protein and mrna rna in macrophage. ipm can reverse this effect of ox-ldl . this may be one of antiatherogenic mechanism. 　　key atsum (ipm)； macrophage ； loatsum，ipm）为豆科木篮属植物，以根或全株入药。.又名一味药、野绿豆、马料梢、山皂角、野篮枝子。性味苦、涩，平，具有清热解毒、消肿散结之功效。用于感冒咳嗽，扁桃体炎，颈淋巴结结核，小儿疳积，痔疮；外用治疔疮。该植物广泛分布于全国各省市，资源丰富［1～3］。我们曾研究发现马棘醇提取部位具有显著镇痛作用［4］。本研究探讨70%马棘醇提物（ipm）对小鼠巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　gibco公司dmen培养基和小牛血清；抗ldl-r多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）；ldl（中国协和医科大学基础生化所）；大连宝生物工程有限公司逆转录系统和pcr core system；引物（武汉博士德生物工程有限公司）；小鼠单核巨噬细胞rapus 公司xdp-1倒置显微镜；sheldon lab 公司tc 2323 型co2 培养箱；依地酸（edta，sigma公司），3,3二氨基联苯胺（dab）。 　　1.2　马棘醇提取物的制备［5］ 　　马棘枝叶采自湖北建始，经湖北民族学院鲁开功教授鉴定为豆科植物马棘（indigofera pseudotinctoria matsum，ipm），经10倍量70%乙醇回流提取两次，过滤，浓缩蒸干，研末，收率为14.3%。 　　1.3 小鼠单核巨噬细胞raen培养液，通以5 % co2恒温37℃培养48～72 h，细胞融合后，用0.1％胰蛋白酶和edta0.08 %的混合消化液消化传代。实验前将细胞接种于细胞培养板，在无血清、无酚红的培养液中通以5 % co2，37℃，培养12 h备用。 　　1.4 氧化低密度脂蛋白（ox-ldl）的制备［6,7］ 　　将ldl置于恒温37℃、ph 7.2的pbs溶液（cuso4，10 μmol·l-1）透析24 h，在含0.1 % edta的pbs中透析24 h终止反应，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌备用。脂蛋白氧化修饰程度以硫代巴比妥酸反应物质值来表示。结果ox-ldl为 21.4 μmol·l-1，ldl为 2 .2 μmol·l-1，说明ldl被氧化。 　　1.5 动物分组共分6组，即：对照组（control group,cg）；ox-ldl组（ox-ldl group,olg）；肝素组（100 mg·l-1,heparin group,hpg）；ipm 100，200，400 mg·l-1保护组（ipm-100,200,400）。取细胞计数为1×108个细胞·l-1的备用传代培养细胞，按每孔500μl 接种于6孔板，每组5孔，12 h细胞融合后，更换无血清无酚红dmen培养液，后4组（hpg