利用基因枪转化技术培育抗病观赏百合种质材料.pdfVIP

利用基因枪转化技术培育抗病观赏百合种质材料幸??????????鲫??，??????张克?韵樵?王文和?菲?薛敦孟?逗瘟??????????基因导入百合现代栽培品种中，为花卉性状改良和提高其抗性提供了全新的思路，即将抗疴??南喙鼗??牧?????????????????．我国是百合属植物的自然分布中心，种类多，分布广，生态习性各异，且观赏、食用、药用类百合栽培历史十分悠久，具有良好的种质资源基础。观赏百合是多年生的球根花卉，花朵硕大，色彩丰富，花姿优美，既能做切花和盆花，又能在园林绿地中应用，具有球根花卉之王的称号，在切花、盆花具有重要的地位。尤其切花方面是目前我国四大名切花之一，在国内外鲜花市场中走俏，近几年百合生产和消费也逐年递增。但由于百合的病害十分严重，如百合鳞茎无皮，易受灰霉病、茎腐病、疫病等真菌性病为害，造成产量和品质下降。抗病育种成为近年来百合育种工作的一个新热点，已取得一定进展，但其中某些病害尚未找到有效的防治方法。不断成熟的生物技术工程技术，特别是基因工程技术，将外源因转入栽培品种，从中筛选出既具有优良的观赏价值，又具有较强抗性的植株?;?蚣际?更有望解决百合这一类问题??。??年，???用基因枪法成功地将抗黄瓜花叶病毒??幕?蜃;?搅搜?皇后中‘引。本文报道的是利用几丁质合成酶基因，通过基因枪介导法转化百合愈伤组织，以期望得到抗病百合株系，为百合抗病育种工作提供优良材料。??植物材料?．北京农学院园林系???；??本┦腥蟛┣蚋?ɑ苡邢薰?????摘要利用基因枪法，以几丁质酶基因转化麝香百合愈伤组织代号?、??、?，在轰击压力????⒑浠骶嗬??、为?ァ?．?ァ?％、??％，有可能获得转基因植株。??????????，??，????；??????????穏金粉／枪处理条件下，经抗性培养基筛选，从筛选愈伤组织中分别得?辍?株、?辍?株植株。筛选频率分别关键宇几丁质酶基因；基因枪转化；百合???‘?．????????珺???，???；?瓸????．，???珺???，????????籩????琧??????ィ?．?ィ?，??％??????????????．?’北京农学院农业应用新技术北京市重点实验室资助。’?????】?????????????????????，?????????；?? 喇己?％蔗旃?％琼脂。取上面的继代愈衔缝织?┗屎??谟盏加?伺嘌??钅坎煌?目股?亟?忻舾行允匝椋????蕨粒力???，禽目酶基因?????苊富??，由孛莺科学院遗传褫究所摄供。?蠰?％蔗糖?．?デ碇???椒??峁?治?雪皇后品种????????盼#?、??、??渲?与??米;?牧鲜乒庹沼?俗橹?????品种所用转化材料为暗培养白化苗的愈伤组织。??转化所用质粒??培养基采用?基本培养基与?基本培养。???培养基：醛培养蒸???????フ崽撬小?％琼脂；??叭固体培养基：?培养基????檀?嘌??篗?嘌????．???????／??フ崽???％琼脂；??ぷ屡嘌??好裇培莽基???甋?????外植体诱导及分化外植体的诱导及分化在??嘌??辖?校?诤诎堤跫?拢?嘌?露?????，经?—??嘌?磊，获褥鑫他时片或幼苗。??愈伤组级的诱导与继代愈伤组织的诱导与继代在??嘌???值：???希?又稚鲜霭谆?镀??诤诎堤跫?拢?嘌?滠发?。?℃，经∞。??竦冒谆??俗橹??分嘱裂┗屎?与?慌?痹诔味任????妫?馇???庹帐奔湮??，?跫?驴苫竦糜?俗橹??分治Q├莺?与?Ｉ鲜鲇?俗橹??继代培养基上继代，每嚣周继代一次，两培养条件?露龋?庹盏?与诱姆相同，这些材料为后面的转化做备用。组织置于附加不同质量浓度卡那霉素?、?、?、?、???疞?嘌?跫??希?ㄆ诩锹纪庵蔡搴直?情况。?基因枪转化参数采用??獴?公司生产的?????疘??透哐购て??蚯梗?凑崭等僬训戎鞅嗟摹吨参镆糯?;?技术手册》提供的方法制备微弹载体。轰击参数????鸱郏?浠餮沽????，??．?金粉／?郑??击距离势??：浠鞴郊绦??复???。强。??抗生素敏癌性实验将百合愈伤组织?┗屎??又衷?、?、?、?、???琇卡那霉素的??嘌????后观察竭变情况。结果和唐东芹等人的试验结果基本相同㈨。??抗生素敏感性实验表?┗屎?睹培养愈伤组织卡那霉素敏感性试验利用基因枪转化技术培育抗病观赏百隶种质材科??—?????疞???? 百合转基因后愈伤组织筛选、繁殖、鉴定???愈伤组织筛选第一次筛选每个培养皿愈伤数目为：???觯?桓霭朐潞?中间继代一次?鄄旌直淝榭觯??计结果见表??第二次筛选：每个培养瓶中愈伤数目为：??个，一月后观察褐变情况，统计见表???光照愈伤?中国球根花卉年报?白化愈伤??／?．???／皿．??图?谝淮紊秆≈?号愈伤组织表?っ缗嘌?????疞卡那毒素愈伤组织培养瓶数褐