干扰素是.ppt

第十三节　基因工程药物制造实例;广谱抗病毒活性（rhuIFNα） 慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎。 直接抗肿瘤活性（rhuIFNα） ??毛细胞和慢性髓样白血病、Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。 免疫调节活性——治疗慢性肉芽肿瘤（rhuIFNγ） 多发性硬化症rhuIFNβ;体外诱生干扰素制备工艺：Sendai病毒诱导人白细胞;人源转化细胞系培养生产工艺：;基因工程大肠杆菌发酵生产工艺：;3、干扰素生产工艺路线（4）;宿主：腐生型假单胞杆菌（Pseudomonas putida） 上市产品：IFN α-2b/安福隆 表达产物：无糖基化可溶性蛋白质，具有天然分子结构和生物活性 工艺特点： ??发酵周期短：几个小时 ??无需变性、复性过程，获得有活性产品 ;1、基因工程假单胞杆菌菌种建立 2、菌种库的建立与保藏;第一步：干扰素α-2b基因的克隆 P73 图2－13;第一步：干扰素基因的克隆(RT-PCR) 制备白细胞，病毒诱导，分离mRNA,反录酶合成cDNA,PCR，基因连接质粒, 转化E.coli,筛选鉴定克隆。 测序：编码人IFNα-2b基因序列,501bp，165aa。;第二步：表达载体构建;第三步：工程菌构建;2、菌种库的建立与保藏;3.2 干扰素的发酵工艺过程;取保存工作种子批菌种，室温融化 摇瓶培养：30℃，pH7.0，250 r/min，18±2h 检测：OD值和发酵液杂菌检查。;接种：接入50L种子罐，接种量10%。 培养：30℃，pH7.0。 控制：级联调节通气量和搅拌转速 溶解氧（DO）为 30%，3～4h，OD4.0。 检测：显微镜和LB培养基划线检查，控制杂菌。;接种：通入300L培养基的发酵罐，接种量10%。 控制：级联调节通气量和搅拌转速。 前4h：30℃，pH7.0，DO为30%。 4h后：20℃，pH6.0，DO为60%，5～6.5h。 终点控制：OD值达9.0±1.0，5℃冷却水快速降温至15℃以下。 检测：发酵液杂菌检查;连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min离心收集。 菌体保存：－20℃冰柜，不超过12个月。 检测：干扰素含量、菌体蛋白含量等。;3.3 干扰素的分离纯化工艺过程;3.4 质量控制标和要求;干扰素的剂型 冻干粉针剂 临床上早期使用的、世界上应用最广的一类干扰素制剂, 同时它的生产工艺也最为稳 注射剂( 水针剂) 临床最为常用, 主要用于病毒感染性疾病和肿瘤的??疗 栓剂 在临床上被用来治疗由人类疱疹病毒和乳头瘤病毒感染引起的宫颈糜烂。 干扰素滴眼剂 病毒性角膜炎 喷雾剂 可以用来治疗某些病毒性皮肤病; 同时它可以喷入鼻腔或口腔, 用来预防和治疗某些呼吸系统疾病, 如感冒、口唇疱疹、SARS等.;复习;作业 1、表达载体必须具备的条件有哪些？ 2、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？ ;对由基因重组技术所获得的蛋白质药物产品进行鉴定时，常做哪些项目分析？