细胞生物学实验考考试样题和实验思考题答案.doc

PAGE  PAGE 7 细胞生物学实验考试样题 填空题（2分/每空，共30分） 1、洗液由 重铬酸钾、 浓硫酸和蒸馏水组成。 2、1640培养基包括RPMI1640培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。 3、鉴别活细胞的染液是0.4%台盼蓝溶液 ;鉴别细胞核的染液是 甲基绿-派洛宁染液；鉴别线 粒体的染液中性红-詹纳斯绿染液。 4、细胞核分离的基本步骤是 组织匀浆、离心、纯化、鉴定。 5、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是1%Triton-100 。 二、简答题（5+5+10共20分） 1.线粒体在分离提取过程中，为什么要在0~4℃中进行？ 答：①为了保持组分的生理活性; ②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活 2.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？ 答：①确保实验是在等渗条件下进行； ②防止物质的进出； ③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。 3.细胞的计数步骤和方法。 答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞无色，死 细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。 Ⅰ：每毫升原液细胞数=4个大格细胞总数/4*100*稀释倍数 Ⅱ：细胞存活率(%)=(细胞总数-死细胞数)/细胞总数。 细胞生物学实验思考题答案 实验一 利用各种显微镜观察细胞形态、结构 1、简述显微镜的主要结构和操作要领。 普通生物显微镜由3部分构成： 照明系统：包括光源和聚光器。 光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。 ③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等 使用（一）、观察前准备 检查：底座右侧的光源亮度旋钮是否在“1”位置，即顺时针选到最底位。 开机：①.打开后座主电源开关——绿色按钮 ②打开后座CCD电源开关——红色按钮 白平衡调整：不放切片，在10倍物镜下将电源调整到最亮，然后按底座右方的白平衡按钮（红色）3－5秒之后将光源亮度调回到适中状态。 （二）、观察操作 放上切片，将光源调到自己习惯的亮度。 视度补偿：调节目镜双筒找到自己的瞳距，此时两眼镜下的图象重合在一起，横拉板上的数字（例如：64）就是自己的瞳距，然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置。 调焦：将绿色光标移至视野中央，开始观察，如需提问，按呼叫按钮 （三）、下课时的操作 ①.将光源亮度调到最低“1”刻度。 ②.关掉红色CCD电源开关，再关绿色主电源开关。 ③.套上显微镜套。 ④.耳机及凳放整齐。 2、分析在使用低倍镜、高倍镜和油镜时，对光亮度的要求。 由于从低倍镜到高倍镜的时候视野变暗，物像变大，细胞数目变少，所以光亮度应该调高，但最主要的还是应以自己的视觉舒适为主。 3、分析聚光镜在成像质量中的作用。 聚光镜是在照明光路中的重要组件，用于集中从光源来的光线，是被观察的标本得要明亮和均匀的照明，正确使用聚光镜系统对于发挥显微镜的分辨率和增强像的反差有很大的作用。 实验二 显微摄影 1.、要想得到一张完美的显微摄影照片，应注意哪些方面的问题，主要关键是什么？ 要获得一张好的显微摄影照片，必须注意满足以下几个条件：1制作清晰的标本片，其中组织切片应厚薄适度，染色片不应有多余的染料等。2选择性能优良干净的载玻片和盖玻片。3使用高性能的物镜（最好用复消色差的平场物镜）和聚光器。4采用Kohler照明法。5选择好合适的拍摄胶片。⑥拍摄时应准确地聚焦和选择合理的曝光时间。⑦正确的冲印方法。关键点：为求得高分辨率的显微影像，须选用复消色差物镜与摄影专用目镜或平周目镜配合。显微摄影的照明方法，分为透射照明、落射照明（垂直照明）和明视野与暗视野照明。同时还应注意各种滤色片的选用。 2、结合数码互动显微镜摄影操作，写出操作工程、拍摄关键点以及注意事项。 过程：用数码显微镜仔细观察样品；利用实验台前面的操作面板上的呼叫按钮请求拍照；得到教师允许后，按操作面板上的拍照按钮进行摄影；将所拍摄到的照片挑选后打印出来。拍摄关键点：；注意事项：每次更换装片时要进行白平衡的调整；要注意对光线的调整；要注意屈光度的调整；摄像时要以从目镜观察到的图像为准。 实验三 细胞的亚显微结构观察 1. 比较光镜与电镜工作原理的区别。 电子显微镜的高分辨率主要是因为使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源，波长一般小于0.1nm,由于光源的不同，又决定了电镜和光镜的一系列不同点：电镜使用电磁透镜聚焦，光镜使用玻璃透镜聚焦，电镜筒中要求真空而光镜筒中不要求真空，图像需要用荧光屏来显示或用感光胶皮做记录，光镜成像时利用样本对光的吸收形成明暗反差和颜色变化而电镜利用电子的散射和透射形成明暗反差，光镜的分辨率为200nm,而电镜的分辨率为