第五章遗传工程小鼠精选.pptx

;转基因与转基因动物 转基因超级鼠 1982年，英国的《自然》杂志发表了一篇文章：有两个美国实验小组利用转基因技术，将大鼠生长激素重组基因导入到小鼠受精卵中,培育出具快速生长效应的“转基因超级鼠”。转基因鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快2～3倍，体积大一倍。;遗传工程动物明星;遗传工程动物明星;遗传工程动物明星; 一、转基因小鼠技术的发展史 转基因小鼠技术兴起于60年代，至80年代中期逐渐成熟。其中关键的技术是实现外源基因的导入及整合，这一技术的发展到目前已经历了四个阶段： 1. 实现外源基因的导入。 2. 实现外源基因的定点整合-基因打靶。 3. 实现外源基因的组织特异性表达。 4. 实现外源基因的时间可控性表达。; 第一阶段：实现外源基因的导入 1974年，Jaenisch等用显微注射法将SV40的DNA导入到小鼠的囊胚（blastocyst）中，在子代小鼠的肝、肾组织中检测到了SV40的DNA。这一结果证明将外源基因导入胚胎细胞中并实现整合是可能的。 以后有人用同样的方法实现了外源基因向小鼠受精卵中的转移并能遗传给后代。在基因转移的方法上相继出现了逆转录病毒载体法、电脉冲法等。;超级小鼠的建立 ; 第二阶段：转基因的定点整合。 1987年，美国北卡罗莱纳大学Smithies和犹他大学Capecchi领导的研究小组根据同源重组的原理，实现了导入的外源基因的定点整合，这一技术亦称为“基因打靶”(Gene targeting).基因打靶技术的应用，一方面可以使导入的外源基因定点整合于人们希望整合的部位，从而避免了外源基因随机整合对内源基因的影响。另一方面，人们还可以利用基因打靶技术定点灭活一个内源基因，亦称为“基因敲除”(Gene knockout)。因此基因打靶技术为在整体水平研究某一基因的功能以及进行基因治疗开辟了新的途径。 ;转基因的组织特异性表达;转基因的组织特异性表达;问题：表达时间能否控制？ ;遗传工程动物制作的基本原理和技术;基因工程动物;基因工程动物;嵌合体;嵌合体;嵌合体;转基因动物;第一节、转基因小鼠;转基因技术;早期胚胎-单细胞期受精卵; 受精卵能够分化出各种细胞、组织，形成一个完整的个体，所以把受精卵的分化潜能称为全能性。随着分化发育的进程，转基因会分布到各种组织细胞中去，包括生殖细胞，因此，转基因是可以遗传的。;转基因技术;转基因技术;转基因技术;;一、设计转基因载体;二、雄原核显微注射法;一、DNA显微注射技术;1、注射前准备 用于显微操作的供体和受体母鼠的处理程序（1）供体准备；（2）受体注射前准备，即见下图。 ;;;三、显微注射转基因小鼠模型的建立 ;（4）背景品系的纯化 采用基因导入法继续向C57BL/6或其背景品系回交 ，即可建成以C57BL/6为遗传背景或回交品系为背景的能稳定遗传的近交系。 （5）胚胎冷冻保种 自F1代起，每一代都应冷冻200枚以上胚胎，以防止繁殖过程中出现基因丢失、繁殖障碍或其他原因造成转基因品系断线。 （6）基因表达研究 自F1代以后要重点研究的基因的表达，小鼠形态、功能的变化，组织病理变化，最终建立医学动物模型。 ;胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES）是从早期胚胎内细胞团（ICM）分离出来的，能在体外培养的一种高度未分化的多能干细胞，可被诱导分化为所有机体细胞类型；哺乳动物囊胚期内的细胞团分离出的尚未分化的胚胎细胞（囊胚期内层细胞），但不能发育为胎盘，不具有发育为完整个体的全能性;胚胎干细胞介导;;;转基因技术;转基因技术;转基因技术;转基因技术;基因打靶;转基因动物应用;转基因动物应用;转基因动物应用;转基因动物应用;转基因动物应用;转基因动物应用;转基因动物应用;胚胎工程;胚胎工程;试管动物;克隆;克隆;克隆;;克隆;;克隆;复习思考