发酵工程菌种的来源(2.ppt

　　　发酵工程 课件 Fermentation Engineering; 教学目的：了解工业化菌种的要求以及一些工业化生产菌介绍；了解菌种分离的一般过程；掌握土样采集应注意的问题，菌种的分离方法；掌握优良菌种应具备的基本特性和菌种的选育、种子扩大培养。 教学重点、难点：土样采集应注意不同的土壤特点、地理和气候条件，土样的采集方法； 生化反应分离法；种子扩大培养。 ? ; 内 容 速 览;一、工业化菌种的要求;放线菌（链霉素、四环素、红霉素等） ;初级代谢和次级代谢异同？;概念不同 ;产物不同 ;存在范围不同 ;对微生物的作用不同 ;;可以大量积累;氨基酸生产菌的要求：;3、酶制剂生产有关的微生物;　一、菌种分离的一般过程 　二、微生物材料的标本采集 　　　A、不同的土壤特点　　　 　　　B、地理和气候条件 　　　C 、微生物的生理特性 　　 　　　D 、极端环境条件下采样分离　　　　　 　三、标本的预处理 　四、目的微生物富集的一些基本方法 　五、菌种分离;一、菌种分离的一般过程 P14;遵循原则：材料来源越广泛，越有可能获得新的菌种 一般通过以下途径获得菌种： ①向菌种保藏机构索取有关菌株； ②由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等； ③从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶的产生菌。;国内菌种保藏机构27;国外菌种保藏机构; 自然界中微生物极其丰富，土壤是微生物最集中的地方，所以土壤样品往往是采集的首选目标。 土样采集应注意以下问题： 　A、不同的土壤特点 　B、地理和气候条件 　C 、微生物的生理特性 　D 、极端环境条件下采样分离;A、不同的土壤特点P15;B、地理和气候条件 ;C、微生物的生理特性 ;Ｄ、极端环境条件下采样分离;三、标本的预处理 提高菌种分离的效率 ●物理方法：加热(55℃,6min；100℃,1h；40℃ 2-6h)、膜过滤法、离心法、空气搅拌法 ●化学方法：含1%几丁质培养基、用CaCO3提高pH值进行培养（链霉菌属） ●诱饵法：用涂石蜡的棒置于碳源培养基中（诺卡氏菌）、花粉（游动放线菌）、蛇皮（小瓶菌属）、人头发（角质菌属）;小瓶菌属;富集的基本方法： 1、控制营养：如以唯一碳源或氮源作底物； 2、控制培养条件：如pH、温度、通气量等； 3、抑制不需要的种类。;富集培养方法： 1、分批式富集培养：指将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复几次后，再取此富集培养物接种至固体培养基上，以获得单菌落。转种是关键。 2、恒化式富集培养：通过改变限制性基质浓度，来控制两类不同菌株的比生长速率。;五、菌种分离;1、常规分离法：平板划线法、稀释分离法和涂布法;Date;A 分区划线法 B 连续划线法 ; 将样品分散到最低浓度; 返回;例1：分离某种产生有机酸的菌株时，在培养基中添加碳酸钙。 ;;;;;§3 菌种选育; （1）菌种细胞的生长活力强； （2）生理性状稳定； （3）纯、具有抗噬菌体感染的能力； （4）稳定高产，与目标产品性质相近的副产物及其他产物少； （5）能采用价格便宜，来源广泛的原料，并且转化效率高。;自然状态下，碱基对发生自然突变的机率为10-8～10-9;自然突变引起的原因;;自然选育操作步骤： ;自然选育方法;自然选育方法;例：抗生素菌种选育;自然选育方法;自然选育方法;二、诱变育种 P55;化学诱变剂;（一）诱变剂处理过程中几个有关的问题;化学诱变剂都具毒性，其中90%以上是致癌物质或极毒药品，使用时要格外小心，不能直接用口吸，避免与皮肤直接接触，不仅要注意自身安全，也要防上污染环境，造成公害。 ;NTG(亚硝基胍）是一种强烈致癌物质，操作时要带橡皮手套，穿工作服，带口罩，用称量瓶称量，最好在通风橱中进行。凡接触过NTG的器皿必须及时、单独处理，例用自来水大量冲洗或用1-2N的NaOH浸泡过夜，洗净。 EMS（甲基硫酸乙酯）是剧毒的诱变剂，在整个诱变过程，包括配制药品、操作处理、保存等都要严守安全，不能接触皮肤，所有接触过EMS的器皿，单独用大量水冲洗洗涤，或用10％NaS2O3溶液浸泡过夜，再用清水冲洗干净。 ; 定义：出发菌株指用于诱变育种的最初菌株或每代诱变的 试验菌株。;出发菌株及生理状态：真菌、酵母106个/ml，放线菌孢子106~107个/ml,细菌108个/ml， 细菌选择对数生长期，真菌和放线菌使用幼年孢子，芽孢细菌也可以用芽孢进行诱变处理。 力求90%以上为单孢子，制菌悬液用生理盐水或缓冲溶液。;3、诱变剂的选择;4、诱变剂